李学伍，刘媛，王丽，邓瑞广，赵东，杨继飞，柴书军

(1.河南省农业科学院动物免疫学重点实验室，河南郑州450002; 2.河南科技大学动物科技学院，河南洛阳471023)

鸡3种主要DNA病毒多重感染复合PCR检测方法的建立

李学伍1，刘媛2，王丽1，邓瑞广1，赵东1，杨继飞1，柴书军1

(1.河南省农业科学院动物免疫学重点实验室，河南郑州450002; 2.河南科技大学动物科技学院，河南洛阳471023)

依据GenBank中注册的鸡马立克氏病病毒(MDV)、鸡传染性喉气管炎病毒(ILTV)、鸡痘病毒(FPV)基因组核苷酸序列中的保守序列设计引物，3种病毒各设计3对引物，共计9对引物，经生物学软件筛选后，得到3对相互匹配较佳的引物。3对匹配引物经单一PCR验证后，优化复合PCR反应条件，确定最佳的退火温度、引物浓度和Taq DNA聚合酶浓度;经特异性、敏感性试验及简化PCR试验，建立简易复合PCR检测方法。复合PCR扩增出的3条带大小与预期一致，即228 bp(MDV)、400 bp(ILTV)、499 bp(FPV);建立的复合PCR方法能同时检测出100 fg MDV、ILTV、FPV的DNA。同时依据PCR技术原理，将经典的三温热循环改进为二温热循环试验，即将退火和延伸合并为一步(62℃)，缩短了反应时间。建立的3种病毒的复合PCR检测方法具有较高的特异性和敏感性，可以用于临床病料的快速诊断。

马立克氏病病毒;传染性喉气管炎病毒;鸡痘病毒;DNA病毒;复合PCR

鸡马立克氏病、传染性喉气管炎、鸡痘分别是由马立克氏病病毒(Marek’s disease virus，MDV)、传染性喉气管炎病毒(infectious laryngotracheitis virus，ILTV)、鸡痘病毒(fowlpox virus，FPV)引起的鸡病毒性传染病，病原体均为线性双股DNA病毒，其中MDV、ILTV为疱疹病毒科成员，FPV为痘病毒科成员［1-2］。MDV和ILTV一旦感染鸡群则终身带毒，2种病毒均存在于很多鸡场，在非免疫鸡场往往引起大群发病，即便在严格免疫的鸡场也时常发病，很难根除;鸡痘是鸡常见的传染病，在不同年龄段的鸡群中经常发生，往往造成雏鸡的大批死亡。……