陈逸轩，刘燕，娄丽丽，时妍梅，陈文莉，陈新年*

（兰州大学1第一临床医学院,2基础医学院病理生理研究所，兰州 730000）

LKB1抑制人巨细胞肺癌细胞的增殖和迁移侵袭、m TOR磷酸化与VEGF和MM P9表达

陈逸轩1Δ，刘燕2Δ，娄丽丽1，时妍梅2，陈文莉2，陈新年2*

（兰州大学1第一临床医学院,2基础医学院病理生理研究所，兰州 730000）

目的分析肝激酶B1（liver kinase B1, LKB1）对人巨细胞肺癌（the people giant cell lung cancer，PGCL3）细胞增殖、迁移、侵袭的影响及其机制。方法构建真核表达载体pCMV-LKB1，转染人巨细胞肺癌细胞。转染后48h，用免疫印迹法检测各组细胞LKB1蛋白表达水平，明确转染PGCL3效率。转染后每隔12h、连续72h检测LKB1对细胞增殖能力的影响；Transwell小室检测转染后各组细胞迁移、侵袭力。提取各组细胞蛋白检测基质金属蛋白酶2（matrix metalloproteinase 2，MMP2）、基质金属蛋白酶9（matrix metalloproteinase 9，MMP9）、雷帕霉素靶蛋白（mammalian target of rapamycin，mTOR）和血管内皮生长因子（vascular endothelial grow th factor, VEGF）的表达水平。结果pCMV-LKB1经PCR、双酶切及DNA测序鉴定后，证实目的基因片段插入方向正确，核酸序列与NCBI公布的LKB1的核酸序列一致；免疫印迹分析显示，转染pCMV-LKB1的PGCL3细胞中LKB1表达水平明显增高，表明pCMV-LKB1构建成功。增殖曲线分析和5-乙炔基-2，脱氧嘧啶核苷（5-ethynyl-2，-deoxyuridine，EdU）检测显示，转染pCMV-LKB1能显著抑制PGCL3细胞的增殖；Transwell小室检测显示，过表达LKB1可显著抑制PGCL3细胞的迁移与侵袭；免疫印迹分析显示，过表达LKB1的PGCL3细胞其LKB1下游分子中总mTOR表达量不变，磷酸化mTOR（p-mTOR）水平降低，mTOR下游分子VEGF表达量也显著降低，迁移侵袭相关蛋白MMP2表达无变化，但MMP9水平显著降低。结论LKB1可能通过下调PGCL3细胞p-m TOR水平，降低VEGF表达，从而抑制巨细胞肺癌细胞增殖，并可能通过下调金属基质蛋白酶MMP9的表达，降低巨细胞肺癌细胞迁移侵袭能力。……