毛睿哲 封其华

·技术应用·

血液及尿液巨细胞病毒DNA检测在婴儿肝炎综合征中的应用分析

毛睿哲 封其华

目的检测婴儿肝炎综合征患者血液HCMV-DNA及尿液HCMV-DNA,比较两者是否存在统计学差异。方法选取189例婴儿肝炎综合征的患者作为研究对象，通过荧光探针-PCR方法检测其血液及尿液HCMV-DNA。结果189例婴儿肝炎综合征病例中，感染HCMV者共79例，占样本总数的41．8%。79例HCMV感染患儿中，从尿液中检出HCMV-DNA者共68例，占所有HCMV感染者的86．1%；从血液中检出HCMV-DNA者共71例，占所有HCMV感染者的89．9%。两者比较，差异无统计学意义（P＞0．05）。结论尿液标本可以作为婴儿肝炎综合征患者合并HCMV感染的标本来源，具有重要诊断价值。

婴儿肝炎综合征；人巨细胞病毒脱氧核糖核酸；尿液；血液

婴儿肝炎综合征以肝细胞性黄疸、肝肿大及质地异常和肝损伤为特征[1]。其病因复杂，合并症或并发症多，预后情况各不相同，严重者可出现肝硬化、肝昏迷、肝肾综合征，甚至死亡[2-3]。本文将通过对婴儿血液HCMV-DNA检测及尿液HCMV-DNA检测进行比较，讨论两种类型的标本在婴儿肝炎综合征中的诊断是否存在统计学差异。

1 材料及方法

1.1 研究对象

选取我院自2013年1月—2016年12月收治的婴儿肝炎综合征患儿189例作为研究对象。所有病例均符合婴儿肝炎综合征诊治修订方案[4]，其中男102例、女87例，年龄为1～12个月，平均年龄（3.8±0.5）个月。

1.2 研究方法

1.2.1 标本采集及仪器 （1）血液标本采集：采取婴儿肝炎综合征患者空腹时血液3 ml，并置于EDTA-K2抗凝管内，充分混匀；（2）尿液标本采集：采集婴儿肝炎综合征患者晨尿10 ml于干燥灭菌玻璃管内。所有标本均立刻送检。（3）分析仪器及试剂：Roche LightCycler 489型荧光PCR仪及其配套HCMV-DNA检测试剂盒。

1.2.2 标本处理 （1）血液标本处理：EDTA-K2抗凝血经4 000 rpm离心10分钟后，取上层血浆100 μl，加入等体积的浓缩液，12 000 rpm离心5分钟，弃去上清液，加入50 μl核酸释放剂，用枪头挑起沉淀，吸打若干次，将沉淀打散混匀，作为待测样本备用；（2）尿液标本处理：取1 ml样本，12 000 rpm离心5分钟，弃去上清液后加入50 μl核酸释放剂，与沉淀震荡或移液枪吸打混匀，作为待测样品备用。

1.2.3 标本分析 标本处理完成后，将标本置于PCR反应管内，设定阴性及阳性对照，并加入到Roche LightCycler 489扩增仪样品槽内，按本实验室SOP继续进行标本检测及分析程序，记录各标本检测结果。

1.3 统计学方法

采用SPSS 17.0软件对数据进行分析处理，计数资料以率表示，采用χ2检验，以P0.05表示差异具有统计学意义。

2 结果

2.1 结果统计

患儿的血液及尿液标本中均检测出HCMV-DNA，见表1。

2.2 数据分析

189例婴儿肝炎综合征患者感染HCMV者共79例，占样本总数的41.8%。79例HCMV感染患儿中，从尿液中检出HCMVDNA者共68例，占所有HCMV感染者的86.1%；从血液中检出HCMV-DNA者共71例，占所有HCMV感染者的89.9%。两者比较，差异无统计学意义（P＞0.05）。

3 讨论

婴儿肝炎综合征的病因及发病机制较多[5-6]，HCMV病原体检测是鉴别婴儿肝炎综合征发病原因的重要筛检要素。目前，临床上已广泛开展血液及尿液的HCMV-DNA检测，用以诊断婴儿HCMV感染及鉴别婴儿肝炎综合征的病因。此样本研究过程中，仍然存在11例尿液HCMV-DNA阴性，但血液HCMV-DNA阳性的病例。从婴儿的生长发育规律来看，这可能是由于婴儿肾功能发育不全，尿液浓缩功能不全，导致尿液中病毒含量较低[7]。而在平时的尿液HCMV-DNA常规检测过程中，也存在某些尿液标本取自于补液后，或刻意给予婴儿饮水或饮奶后采集的尿液作为检测标本的情况。这些尿液的比密通常比晨尿低，病毒成分被稀释，以至于其含量低于仪器检测底限，而导致假阴性的结果[8-9]。因此，若采用尿液检测HCMV-DNA，其结果为阴性时，不能完全排除HCMV感染，需采集血液进行HCMV-DNA检测，以免漏诊。在平时的日常检测过程中，针对尿液HCMV-DNA检测，建议使用晨尿进行检验，而不提倡采用补液后尿液，或经刻意饮水或饮奶后排泄的尿液作为检测标本。

综上所述，血液HCMV-DNA检测与尿液HCMV-DNA检测均有助于婴儿肝炎综合征病因的鉴别及排除，而尿液标本取材较血液标本方便，更值得在临床上推广。

表1 婴儿肝炎综合征患者尿液HCMV-DNA及血液HCMV-DNA指标比较

[1]刘王凯，苏毅华，沈振宇，等．婴儿肝炎综合征222例病因分析[J]．广州医学院学报，2010，38（4）：29-32

[2]李凡，刘晶星．医学微生物学[M]．7版．北京：人民卫生出版社，2009：302-303．

[3]杨波，李刚，孙正芸，等．婴肝综合征HCMV感染临床与肝功能损害相关性研究[J]．医学理论与实践，2001，14（6）：482-485．

[4]朱启镕，王晓红，王建设．婴儿肝病综合征诊治修订方案[J]．中华传染病杂志，2004，22（5）：357．

[5]沈晓明，王卫平．《儿科学》[M]．7版．北京：人民卫生出版社，2010：256-257．

[6]方峰，董永绥．诊治巨细胞病毒感染时应注意的几个问题[J]．中国实用儿科杂志，2000，15（2）：86．

[7]王敬衍，程丽敏，钱冬萌，等．不同标本巨细胞病毒DNA检测在小儿巨细胞感染中的应用[J]．世界最新医学信息文摘（连续型电子期刊），2016，16（80）：131-132．

[8]朱磊，朱俊岭，钮明杨，等．熊去氧胆酸对婴儿肝炎综合征炎症细胞因子的影响[J]．中国病理生理杂志，2015，31（6）：1142-1144．

[9]龙梅，朱莉，刘文莉，等．肝活检病理检查对婴儿肝炎综合征的临床应用价值[J]．中华实用儿科临床杂志，2013，28（19）：1491-1493．

Analysis of the Application of Cytomegalovirus DNA Test in Blood and Urine for Infantile Hepatitis Syndrome

MAO Ruizhe FENG Qihua Department of Clinical Laboratory, Children's Hospital Aff i liated to Suzhou University, Suzhou Jiangsu 215003, China

ObjectiveTo detect the blood HCMV-DNA and urine HCMVDNA in infants with hepatitis syndrome, and to compare whether there is statistical difference between them.MethodsThe blood and urine HCMVDNA of 189 infants with hepatitis B syndrome were detected by fl uorescent probe -PCR.ResultsIn the 189 infants with hepatitis syndrome, 79 were infected with HCMV, accounting for 41.8% of the total sample. In the 79 infants with HCMV infection, 68 cases were detected from urine, accounting for 86.1% of all HCMV infections. 71 cases of HCMV-DNA were detected in the blood, accounting for 89.9% of all HCMV infected patients. The difference was not statistically significant between urine HCMV-DNA test and blood HCMV-DNA test, P＞0.05.ConclusionUrine specimen can be used as the source for detect HCMV infection in infants with hepatitis syndrome. And this has important diagnostic value.

infant hepatitis syndrome; integrated DNA of human cytomegalovirus; urine; blood

R725

A

1674-9308（2017）13-0066-02

10．3969/j．issn．1674-9308．2017．13．034

苏州大学附属儿童医院检验科，江苏 苏州 215003

封其华