卜媛媛 金 鹏 刘 艳

（淮安市食品药品检验所，江苏 淮安 223000）

HPLC法测定盐酸贝那普利片中贝那普利拉和盐酸（3S、1R）-贝那普利的含量

卜媛媛 金 鹏 刘 艳

（淮安市食品药品检验所，江苏 淮安 223000）

用HPLC法测定贝那普利拉和盐酸（3S、1R）-贝那普利含量。贝那普利拉在0.0763～30.51 µg/mL范围内线性关系良好，盐酸（3S、1R）-贝那普利在0.0263～10.504 µg/mL范围内线性关系良好。该法操作简便快捷，重现性好，结果准确可靠。

HPLC；贝那普利拉；盐酸（3S、1R）-贝那普利

1 目 的

建立灵敏的HPLC法，评价部分现行质量标准未控制贝那普利拉和盐酸（3S、1R）-贝那普利的样品质量。

2 仪器与试药

仪器：METTLER XP-6型电子分析天平、METTLER XSDU205型电子分析天平、岛津LC-20AB高效液相色谱、Aglient 1260高效液相色谱仪。试药：盐酸贝那普利对照品（UV法含量：100.0%，HPLC法含量：99.5%，中国药品生物制品检定所；批号：100768-201102）、贝那普利拉对照品（中国药品生物制品检定所；批号：100771-201001）、盐酸（3S、1R）-贝那普利对照品（CAT. NO.1048630 USP ROCKVILLE.MD LOT 10K261）、甲醇（色谱纯）、氯化钾、高氯酸钠、盐酸（分析纯）、水（纯化水），盐酸贝那普利片为省评价抽验样品。

3 实验方法

3.1 色谱条件：照高效液相色谱法（附录V D）测定，用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以氯化钾缓冲液（1000 mL中含0.090 mol氯化钾和0.010 mol盐酸，pH2.06）-水-甲醇（17∶25∶58）为混合溶液，每1000 mL混合溶液中加入612 mg的高氯酸钠为流动相；柱温为35 ℃；流速为1 mL/min。

3.2 对照品溶液制备：精密称取的盐酸贝那普利对照品（105 ℃减压干燥5 h）2.794 mg，置50 mL量瓶中，加流动相溶解并稀释至刻度，作为盐酸贝那普利对照品贮备液；精密称取贝那普利拉对照品6.102 mg，置40 mL量瓶中，加流动相溶解并定容至刻度，作为贝那普利拉对照品贮备液；精密称取盐酸（3S、1R）-贝那普利对照品2.626 mg，置50 mL量瓶中，加流动相溶解并定容至刻度，作为盐酸（3S、1R）-贝那普利对照品贮备液；精密量取上述3种贮备液各10 mL，置50 mL量瓶中，加流动相定容至刻度，作为混合对照品贮备液，精密量取混合对照品贮备液20 mL置40 mL量瓶中，加流动相定容至刻度，作为混合对照品溶液。

图1 混合对照品溶液色谱图

图2 供试品溶液色谱图

3.3 供试品溶液制备：取本品20片，精密称定，研细，精密称取细粉适量（约相当于盐酸贝那普利25 mg），置25 mL量瓶中，加流动相适量，超声处理15 min，放冷，用流动相稀释至刻度，摇匀，用滤膜过滤，作为供试品溶液。

3.4 测定法：按3.1项下色谱条件，精密量取对照品溶液和供试品溶液各20 µL，注入液相色谱仪，记录色谱图（图1、2），盐酸贝那普利峰与贝那普利拉峰和盐酸（3S、1R）-贝那普利峰的分离度分别为12.08、5.54。供试品溶液色谱图中如有贝那普利拉峰和盐酸（3S、1R）-贝那普利峰，按外标法以峰面积计算。

4 方法学验证

4.1 线性范围：精密量取3.2项下混合对照品贮备液0.1、1、2、5、10、20 mL，分别置40 mL量瓶中，加流动相定容至刻度，摇匀。分别精密量取上述溶液和混合对照品贮备液20 µL，注入液相色谱仪，测定峰面积，峰面积为横坐标，以浓度为纵坐标，进行线性回归。

贝那普利拉：回归方程为y=0.0369x-0.0077，R=0.9999，表明贝那普利拉在0.0763～30.51 µg/mL范围内线性关系良好。

盐酸（3S、1R）-贝那普利：回归方程为y=0.0428x-0.0113，R =0.9999，表明盐酸（3S、1R）-贝那普利在0.0263～10.504 µg/mL范围内线性关系良好。

4.2 检测限与定量限：精密量取混合对照品溶液20 μL，注入液相色谱仪，查看信噪比，不断逐步稀释直至达到规定，记录色谱图。贝那普利拉的检测限为0.008 μg/mL，定量限为0.023 μg/mL。盐酸（3S、1R）-贝那普利的检测限为0.011 μg/mL，定量限为0.026 μg/mL

4.3 稳定性：取供试品溶液（厂家：A有限公司，批号：X0254），在放置于HPLC进样盘的情况下，分别在制备后0、2、6、14、20、24 h进样，测得其峰面积，贝那普利拉和盐酸（3S、1R）-贝那普利RSD%分别为1.56%、0.84%。结果表明：供试品溶液在24 h内稳定。

4.4 重复性：按3.3项下供试品溶液制备方法，精密称取供试品（A公司，批号：X0254）6份，分别置25 mL量瓶中，加流动相溶解并定容至刻度，摇匀，过滤，分别精密量取20 µL，注入液相色谱仪，记录色谱图，按外标法以峰面积计算，贝那普利拉含量为：0.083%～0.086%、RSD%为1.2。盐酸（3S、1R）-贝那普利含量为0.075%～0.078%，RSD%为1.4。结果表明重复性良好。

4.5 准确度：精密称取供试品（厂家：B有限公司，批号：110406）细粉适量，按3.3项下方法制备9份供试品溶液，分别精密加入贝那普利拉对照品贮备液3、4、5 mL各3份，盐酸（3S、1R）-贝那普利对照品贮备液4、5、6 mL各3份，测定含量。贝那普利拉平均回收率为99.80%，盐酸（3S、1R）-贝那普利平均回收率为99.03%。

5 样品测定

取A公司30批次、B公司15批次、C公司8批次和D公司8批次样品按3.1～3.4项下方法测定，结果如下。

贝那普利拉：各厂家样品中均检出，A样品为0.03%～0.09%，B样品为0.09%～0.29%，C样品为0.08%～0.27%，D样品为0.32%～2.37%；盐酸（3S、1R）-贝那普利：D样品均未检出，B仅有1批检出，为0.01%，A和C样品均检出，分别为0.08%～0.20%、0.01%～0.04%。

A公司现行质量标准虽然设置了贝那普利拉检查项，但仅有4批检出，还有3批未检出有关物质，B公司现行质量标准没有设置贝那普利拉和盐酸（3S、1R）-贝那普利检查项，C公司现行质量标准没有设置盐酸（3S、1R）-贝那普利检查项，D公司现行质量标准虽然设置了贝那普利拉和盐酸（3S、1R）-贝那普利检查项，但贝那普利拉峰处有辅料干扰。我们建立的探索性检验方法，能够检出贝那普利拉和盐酸（3S、1R）-贝那普利，且不受辅料干扰，和盐酸贝那普利分离度良好，具有较高的灵敏度和准确度，可用于盐酸贝那普利片的有关物质检查。

[1] 国家食品药品监督管理局.新药转正标准[S].第四十五册,WS1-(X-347)-2003Z:86-87.

[2] 国家食品药品监督管理局.药品标准[S].YBH10332005.

[3] 国家食品药品监督管理局.药品标准[S].YBH05862004.

[4] 国家食品药品监督管理局.药品标准[S].YBH01662005.

[5] 国家食品药品监督管理局.药品标准[S].YBH13652004.

[6] 国家药典委员会.中国药典.二部[S].北京:中国医药科技出版社,2010:附录208-210.

R927.2

B

1671-8194（2017）16-0044-02