韩 珠 黄东爱 张瑞城 欧月秀 陈江秀 黄家禧 许振华 王小英

(海南省第三人民医院肾内科，海南 海口 572000)

人尿酸盐转运子1第3内含子突变对海南黎族人群高尿酸血症发生的影响

韩 珠 黄东爱1张瑞城2欧月秀 陈江秀 黄家禧 许振华 王小英1

(海南省第三人民医院肾内科，海南 海口 572000)

目的 明确人尿酸盐转运子(hURAT)1第3内含子(hURAT1 IVS-3+11G>A)突变对海南黎族人群高尿酸血症发生的影响。方法 海南黎族高尿酸血症患者100例为观察组，同期行体检的海南黎族非高尿酸血症者100例为对照组。采用突变特异性扩增系统(ARMS)对比两组hURAT1 IVS-3+11G>A等位基因突变情况。结果 观察组hURAT1基因IVS-3+11G>A多态性A等位基因频率显著高于对照组(P<0.05)。经单因素及Logistics回归分析显示：饮酒、体重超重及携带hURAT1 IVS-3+11G>A多态性A等位基因为影响海南黎族高尿酸血症发生的独立风险因素(P<0.05)。结论 hURAT基因突变可能影响了海南黎族人高尿酸血症的发生，这一结果为此类疾病的遗传学病因探索提供了参考。

高尿酸血症；人尿酸盐转运子1；基因突变；等位基因；海南黎族

高尿酸血症基本病理生理过程为嘌呤代谢紊乱而导致外周血尿酸水平异常升高。该病的发病机制尚未完全明确，但目前认为是在饮食习惯、生活方式、性别等因素综合作用下发病〔1,2〕。研究显示人尿酸盐转运子(hURAT)1基因第3内含子11G>A(IVS-3+11G>A)突变与中国汉族人群原发性高尿酸血症的发病密切相关〔3,4〕。基因多态性有明显的种族差异，本研究分析hURAT1基因IVS-3+11G>A突变对海南黎族人群高尿酸血症发生的影响。

1 资料与方法

1.1 一般资料 2012年1月至2014年12月我院接受诊疗的海南黎族高尿酸血症患者100例为观察组，均明确诊断为高尿酸血症。排除标准：合并其他代谢性疾病；合并活动性感染；合并严重肝肾功能障碍；合并恶性肿瘤等终末期疾病。另纳入同期我院行体检的100例海南黎族健康者为对照组。

1.2 hURAT1基因突变检测方法 清晨空腹采集外周血5 ml，采用GenElute试剂盒(Sigma-Aldrich，德国)提取血液基因组DNA。采用突变特异性扩增系统(ARMS)特异引物直接鉴定法检测两组hURATI基因IVS-3+11G>A突变情况。IVS-3+11G>A的引物设计为：内对照片段上游引物L：CTCAGCGGGCAAGCATAGGGT(7496....7516)；内对照片段下游引物R：ACTCCCCAGCCCCCAGGGAA(8090....8071)；IVS-3+11G>A特异性突变引物(下游)T：CCCCTGCATGGCGCCACGTT；IVS-3+11G>A正常引物(下游)N：CCCCTGCATGGCGCCAGGTC。每份标本做T和N两管聚合酶链反应(PCR)：在N管加入含有引物L、R和N的反应体系，在T管加入含有引物L、R和T的反应体系，两管同时进行PCR，然后取PCR产物进行电泳鉴定。PCR反应条件：Robocycler Gradient 40 PCR扩增仪进行温度梯度(50℃～65℃)，确定最佳退火温度为63℃；在Hema4800 PCR仪上进行ARMS，反应体积为25 μl，含基因组DNA 0.5 μg。94℃变性3 min后进行25～30个循环。72℃保温约5 min。15 μl PCR产物于20 g/L琼脂糖凝胶电泳，溴乙啶染色，观察分析实验结果。

1.3 海南黎族高尿酸血症发生的危险因素分析 纳入10个可能影响海南黎族高尿酸血症发生的因素进行单因素分析，包括：性别、年龄、饮酒、吸烟、高血压、糖尿病、高甘油三酯(≥1.9 mmol/L)、高胆固醇(≥6.25 mmol/L)、体重超重(体质指数≥24 kg/m2)、hURAT1基因IVS-3+11G>A携带A等位基因(简称：携带A基因)。将单因素分析所得阳性结果纳入多因素分析模型，分析影响海南黎族高尿酸血症发生的独立危险因素。

1.4 统计学方法 采用SPSS23.0统计软件进行t、χ2检验，Logistics回归分析。

2 结 果

2.1 两组hURAT1基因IVS-3+11G>A突变情况 观察组hURAT1基因IVS-3+11G>A多态性A等位基因频率显著高于对照组(P<0.01)。见表1。

2.2 影响海南黎族高尿酸血症发生的单因素分析 观察组饮酒、高甘油三酯、体重超重及携带A基因的比例均显著高于对照组(P<0.05)。见表2。

2.3 影响海南黎族高尿酸血症发生的独立危险因素 饮酒及携带A基因为影响海南黎族高尿酸血症发生的独立风险因素(P<0.05)。见表3。

表1 两组hURAT1基因IVS-3+11G>A等位基因频率、基因型频率比较〔n(%),n=100〕

表2 两组一般资料比较(n,n=100)

表3 影响海南黎族高尿酸血症发生的独立危险因素

3 讨 论

我国是一个高尿酸血症较为高发的国家，该病常无法彻底治愈，患者即便在正常嘌呤含量的饮食情况下仍然面临痛风发作的可能〔5〕，此外该病还是心血管系统疾病的高危因素〔6,7〕。高尿酸血症在老年人群常见病发生中占有重要的地位，可与痛风、高血压、糖尿病、高血脂、冠心病、肾脏损伤等多种疾病的发生存在一定的因果关联。高尿酸血症是一种在多种因素作用下所产生的疾病，其中遗传学因素越来越受到重视。在尿酸盐的代谢过程中，由于尿酸盐为极性分子，不能自由通过细胞膜脂质双分子层，其在近曲肾小管的重吸收和分泌必须由离子通道来介导〔8,9〕。迄今，在人近曲肾小管上皮细胞膜上发现4个与尿酸转运有关的离子通道，其中hURAT1主要参与肾小管对尿酸的分泌，是尿酸从肾脏排泄的关键离子通道〔10～12〕。本研究提示，hURAT1基因第3内含子突变可能会影响海南黎族人群高尿酸血症的发生。但高尿酸血症作为一种代谢性疾病可能受到多种环境或生活习惯的影响。

1 Maharani N,Kuwabara M,Hisatome I.Hyperuricemia and atrial fibrillation〔J〕.Int Heart J,2016;57(4):395-9.

2 Kuwabara M.Hyperuricemia,cardiovascular disease,and hypertension〔J〕.Pulse (Basel),2016;3(3-4):242-52.

3 韩 琳,于 清,胡东明,等.中国汉族人尿酸盐转运蛋白1基因启动子区多态性与原发性高尿酸血症的关联研究〔J〕.中华内分泌代谢杂志,2012;28(1):36-9.

4 路 杰,王 灿,王 瑶,等.人尿酸盐转运子1基因第3内含子+11G>A单核苷酸多态性功能研究〔J〕.中华内科杂志,2014;53(7):550-4.

5 Hisatome I,Kuwabara M.Hyperuricemia plays pivotal role in progression of kidney disease〔J〕.Circ J,2016;80(8):1710-1.

6 Acevedo A,Benavides J,Chowdhury M,etal.Hyperuricemia and cardiovascular disease in patients with hypertension〔J〕.Conn Med,2016;80(2):85-90.

7 Palazzuoli A,Ruocco G,Pellegrini M,etal.Prognostic significance of hyperuricemia in patients with acute heart failure〔J〕.Am J Cardiol,2016;117(10):1616-21.

8 Peng J,Hu Q,Gu C,etal.Discovery of potent and orally bioavailable inhibitors of human uric acid transporter 1 (hURAT1) and binding mode prediction using homology model〔J〕.Bioorg Med Chem Lett,2016;26(2):277-82.

9 施映枫,徐柳青,严海东,等.尿酸转运蛋白的研究进展〔J〕.中华肾脏病杂志,2014;30(11):876-80.

10 Li C,Yu Q,Han L,etal.The hURAT1 rs559946 polymorphism and the incidence of gout in Han Chinese men〔J〕.Scand J Rheumatol,2014;43(1):35-42.

11 叶德邵,赵东宝.尿酸盐转运体在原发性高尿酸血症中的研究进展〔J〕.中华风湿病学杂志,2012;16(4):271-3.

12 关宝生,白 雪,王艳秋,等.痛风/高尿酸血症患者生活习惯的危险因素〔J〕.中国老年学杂志,2014;34(2):455-7.

〔2016-03-19修回〕

(编辑 苑云杰)

2012年度三亚市医疗卫生科技创新项目(No.YW1215)

韩 珠(1968-)，女，副主任医师，主要从事尿毒症、肾功能障碍研究。

R589.6

A

1005-9202(2017)13-3207-02；

10.3969/j.issn.1005-9202.2017.13.037

1 海南医学院生物技术专业实验室 2 海南医学院附属医院肾内科