王强 俞国庆 黄雅清 傅云泉 陈鑫 庄永泽

Indoxyl Sulfate诱导腹膜间皮细胞转分化的实验研究

王强 俞国庆 黄雅清 傅云泉 陈鑫 庄永泽

目的硫酸吲哚酚（IS）刺激永生化人腹膜间皮细胞株（HMrSV5）后，研究细胞是否发生上皮细胞-间充质转分化（EMT），同时探索转化生长因子β1（TGF-β1）可能在其中的作用。方法体外培养HMrSV5，传代后，随机将人腹膜间皮细胞株分成以3组：对照组：加入4.25%腹膜透析液与培养液共培养；IS处理组：分别用含250 μmol/LIS、500 μmol/LIS、1 000 μmol/LIS浓度的培养液与4.25%腹膜透析液共培养；TGF-β1受体抑制剂组：用含2 μmol/L LY364947+IS的培养液与4.25%腹膜透析液共培养。分别在培养0、4、12、24、48和72 h时间下，采用细胞免疫荧光法观察细胞形态变化，Western Blot法研究细胞α平滑肌肌动蛋白（α-SMA）的表达规律，48 h时用ELISA法测定纤维连接蛋白（FN），层粘连蛋白（LN5）两种基质蛋白的分泌情况。结果（1）免疫荧光法显示：与正常细胞比较，IS处理组细胞由典型的铺路样鹅卵石状，逐渐变细变长，呈梭形改变；而TGF-β1受体抑制剂组细胞形态变化不明显，不如IS处理组；（2）Western Blot法检测结果显示：与对照组比较，IS处理组α-SMA的表达水平明显增加，48 h 时 1 000 μmol/LIS 表达最明显（39.929±2.610 vs 0.996±0.001 ；P ＜ 0.01），差异有统计学意义；与IS处理组比较，TGF-β1受体抑制剂组的表达则明显减少，其中48 h时抑制明显（7.418±3.075 vs 39.929±2.610，P ＜ 0.01），差异有统计学意义 ；（3）ELISA 法结果显示 ：与对照组比较，IS 处理组基质蛋白 FN（1.368±0.040 vs 1.094±0.036，P ＜ 0.01）、LN5（1.031±0.085 vs 0.860±0.063，P ＜ 0.01）的表达均上调，差异有统计学意义；与IS处理组比较，TGF-β1受体抑制剂组 FN（0.925 ±0.15 vs 1.368 ±0.040，P ＜ 0.01）、LN5（0.795±0.426 vs 1.031±0.085，P ＜ 0.01）分泌均减少，差异有统计学意义。结论IS可诱导腹膜间皮细胞发生EMT，TGF-β1的参与可能起重要作用，这为治疗腹膜纤维化可能提供新的靶点。

腹膜间皮细胞；……