刘佳+赵再迪+孙溪

摘 要：用共价结合法和交联法将纤维素酶固定在水热制备的壳聚糖碳材料上，并研究其酶活性。结果表明，游离酶、共价结合酶和交联酶的Km值分别是10.92g/L、3.184g/L和0.3132g/L。游离酶和交联酶的最适温度为40℃，共价结合酶为50℃，且共价结合酶的最适反应温度显著拓宽。相比游离酶，两种固定酶都表现出更好的重复使用稳定性和热稳定性，其中共价结合酶最佳。

关键词：纤维素酶；壳聚糖；水热法；固定化

中图分类号：TQ016 文献标志码：A 文章编号：2095-2945（2017）19-0012-02

前言

纤维素酶是催化纤维素降解成葡萄糖的多酶复合体，化工原料、饲料、燃料、食物和药物等可由葡萄糖发酵得到[1]。游离酶受热易失活，难回收，工业上常将酶固定化利用。壳聚糖由几丁质去乙酰化得到，大量氨基、羟基等电负性基团能与酶结合。但壳聚糖是阳离子聚合物，溶于酸，易被多种非专一性酶降解。目前壳聚糖的改性方法大多通过加入多种化学试剂，不仅对酶有毒害，还使操作复杂化。

水热法模拟自然界的成矿环境[2]，在密闭的反应釜中，以水为溶剂，将常规条件下不易溶解的物质在高温高压条件下溶解并重新结晶，再经过分离得到产物，绿色环保，操作简单。水热法制备的生物质碳材料具有良好的的理化稳定性，相对表面积增大，有大量生物亲和基团，做酶的固定化载体利于酶的结合、底物的扩散[3]。

本文以水热法制备的壳聚糖碳材料为载体，分别通过共价结合法和戊二醛交联法固定纤维素酶，研究酶的米氏常数，最适温度，重复使用稳定性和热稳定性。……