张玉玮，李洁，袁勇，顾继娟，陈鹏



苦荞籽粒芦丁降解酶的纯化、酶学性质及部分一级结构分析

张玉玮，李洁，袁勇，顾继娟，陈鹏

西北农林科技大学生命科学学院，陕西杨凌 712100

张玉玮, 李洁, 袁勇, 等. 苦荞籽粒芦丁降解酶的纯化、酶学性质及部分一级结构分析. 生物工程学报, 2017, 33(5): 796–807.Zhang YW, Li J, Yuan Y, et al. Purification, characterization and partial primary structure analysis of rutin-degrading enzyme in tartary buckwheat seeds. Chin J Biotech, 2017, 33(5): 796–807.

芦丁降解酶催化芦丁降解为水溶性降低的槲皮素，是形成苦荞苦味的主要因素。研究以榆6-21苦荞籽粒粉为材料，通过硫酸铵分级沉淀、疏水层析、阳离子交换层析、凝胶过滤层析分离纯化芦丁降解 酶，SDS-PAGE显示纯化的芦丁降解酶为分子量66 kDa的单一条带。芦丁降解酶的最适pH值为5.0，最适温度为50 ℃。对其催化特性研究表明，该酶的m值为0.27 mmol/L，max值为39.68 U/mg。Cu2＋、Zn2＋、Mn2＋和EDTA对其有不同程度的抑制作用。纯化的芦丁降解酶可耐受50% (/) 的甲醇。Edman降解法测定其N端序列为TVSRSSFPDGFLFGL。MALDI-TOF-MS (基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱) 二级质谱获得了其15个内肽序列。该研究为从转录组数据中确定芦丁降解酶的候选基因及深入研究芦丁降解酶的生物学功能奠定了基础。

苦荞,芦丁降解酶,纯化,特性

荞麦，属于蓼科(Polygnaceae) 荞麦属()。荞麦中，尤其是苦荞中含有芦丁、槲皮素和荞麦碱等重要的生理活性物质。苦荞中黄酮类化合物的含量比普通荞麦高10–100倍[1]，芦丁是苦荞中重要的黄酮类化合物，具有降低毛细血管通透性和脆性、保持及恢复毛细血管的正常弹性等功能。在辅助治疗高血压、糖尿病、视网膜出血等疾病中发挥着重要作用。

荞麦中存在的芦丁降解酶极大限制了芦丁的提取和加工，并且高活性的芦丁降解酶成为高芦丁荞麦育种的重要障碍。……