王彩霞林祥梅吴绍强*徐赓

（1.中国检验检疫科学研究院北京100029；2.山东省沂南县畜牧兽医局）

牛羊肝片吸虫病实时荧光PCR检测方法的建立

王彩霞1林祥梅1吴绍强1*徐赓2

（1.中国检验检疫科学研究院北京100029；2.山东省沂南县畜牧兽医局）

选择肝片吸虫保守的核糖体DNA ITS-2区域设计引物和TaqMan探针，通过对反应体系和反应条件进行优化，建立了实时荧光定量PCR检测肝片吸虫的方法。所构建方法检测质粒模板DNA的动态范围为1×100-1×106拷贝，敏感度可检测到1拷贝质粒DNA，而且与华支睾吸虫、姜片吸虫、卫氏并殖吸虫无交叉反应，特异性良好。以所建立的方法检测虫卵可以检测到2个肝片吸虫卵囊。结果表明，本研究所构建的牛羊肝片吸虫病实时荧光PCR检测方法具有快速、灵敏和特异等优点，可满足养殖场和口岸牛羊及其肉制品肝片吸虫的检测需要。

肝片吸虫；实时荧光PCR；敏感性；特异性；检测

1 前言

肝片吸虫是危害牛羊等反刍动物最主要的寄生虫之一，属扁形动物门（Platyhelminthes）、吸虫纲（Trematoda）、复殖目（Digenea）、片形科（Fascilolidea）、片形属（Fasciola）。虫体主要寄生于黄牛、水牛、绵羊、山羊、鹿和骆驼等反刍动物的肝脏胆管中，也寄生于猪和马属动物，还可感染猫、狗、猪、兔等多种野生动物[1]。因此，肝片吸虫病是家畜及多种食草动物和野生动物的寄生虫病，亦可感染人，属人畜共患寄生虫病。该病在世界各地均有发生，在我国的32个省市自治区都有发生，尤以畜牧业发达的内蒙、吉林、青海、宁夏等地区最严重[2]。肝片吸虫病是农业部《一二三类动物疫病病种名录》中的三类动物疫病，也列入了《中华人民共和国进境动物检疫疫病名录》（第〔2013〕号）中。……