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中国化学品环境管理对本土模式生物的需求和应用

2017-06-27周红郭琳琳卢玲葛海虹高映新

生态毒理学报 2017年2期
关键词:毒理学化学物质鱼种

周红,郭琳琳,卢玲,葛海虹,高映新

环境保护部固体废物与化学品管理技术中心,北京100029

中国化学品环境管理对本土模式生物的需求和应用

周红*,郭琳琳,卢玲,葛海虹,高映新

环境保护部固体废物与化学品管理技术中心,北京100029

适合的实验生物和大量的生态毒理学数据是化学品环境管理的重要基础。应用本土模式生物对我国化学品环境管理十分重要。稀有鮈鲫(Gobiocypris rarus)逐步成为我国化学品环境管理的首选推荐本土模式生物。建议从国际合作交流、遗传学、标准化、敏感性和比对研究等方面促进稀有鮈鲫的国际化。坚持管理与科研相结合,推动本土模式生物的研发和应用。

化学品;稀有鮈鲫;模式生物;本土生物;环境管理

1 化学品环境管理对本土模式生物的需求和要求(Needs and requirements of native model organisms for chemical environmental management)

1.1 化学品环境管理对实验生物的需求

化学品环境管理的根本在于以化学品危害和暴露信息为基础进行危害性鉴别和风险评估,通过风险交流、申报登记、禁止限制等行政措施,预防、控制和减少化学品对生态环境和人体健康的危害。利用合适的模式生物开展生态毒理学测试研究,掌握可靠的化学品环境行为、环境危害信息是化学品环境管理的重要基础。如我国新化学物质申报登记制度[1]要求根据申报数量提交鱼类、溞类、藻类、蚯蚓、鸟类、活性污泥的急性或慢性毒性数据,农药登记制度[2]规定不同类别的农药需提供蜜蜂、家蚕、天敌两栖类、虾、蟹等大型甲壳动物或禽、畜等的毒理学数据(表1)。

1.2 本土生物、模式生物和本土模式生物

本土生物(native organism)又称土著生物或本土物种(native species),是特定生态系统中原生而非因事故或人为引入的物种。

模式生物(model organism)与实验生物(experimental organism, laboratory organism)意思相近。模式生物是指生物现象研究中被选作实验材料的非人类物种,以期对这些物种的研究结果可以应用到其他物种[3]。通常模式生物体积较小,结构简单,培养成本低廉,并可迅速繁殖。此外,最佳的模式生物往往基因组较小,可以通过遗传工程获得不同的基因型。因此,遗传学、医学研究中的模式生物常指具有不同基因型的实验生物,如大鼠(Rattus norvegicus)、小鼠(Mus musculus)、拟南芥(Arabidopsis thaliana)等;而环境科学中的模式生物更多泛指相对而言来源背景清晰、应用广泛的实验生物,如斑马鱼(Danio rerio)、大型溞(Daphnia magna)等。

本土模式生物指用于实验研究的本土生物。本土野生生物通常需要经过筛选、培育、纯化等科学技术手段才可能成为本土模式生物。如青鱼、草鱼、鲢、鳙是我国的四大家鱼,但均不是常用的实验生物。而原产于我国长江上游的稀有鮈鲫(Gobiocypris rarus)[4-7],经过多年培育,已成为我国生态毒理学领域重要的模式生物。

1.3 应用本土模式生物是区域环境保护的重要手段和国际化学品环境管理的惯例

环境保护的重要目标之一是保护生物多样性,保护各地的代表性物种、特有物种、濒危物种。由于生物种群具有生态地域性,不同区域、不同生态系统的代表性生物可能不同。因此,生态环境保护的区域性全球公认。就生态毒理学而言,不同区域、不同生态系统的生物对化学品的敏感性可能不同。如Dyer等[8]研究发现,不同分布区域(寒带、温带、热带)的鱼类物种对污染物的敏感性存在差异。王晓南等[9]研究中美水生生物基准受试物种敏感性差异,发现中美物种对铜(Cu)、毒死蜱、三丁基锡的敏感性分布存在显著性差异(P<0.05),对六价铬(Cr(Ⅵ))、毒死蜱的HC5值差异超过一个数量级。这种情况下,直接采用美国的生物毒性数据或基准值来保护我国的水生生物,可能会存在“欠保护”或“过保护”的情况。因此,环境保护更宜以本土模式生物为实验对象,获得相关毒理学数据,评价化学品对本土生物可能造成的影响,确定适合当地的环境保护目标,体现环境保护的区域针对性。

表1 我国新化学物质申报和农药登记中生态毒理学信息要求所涉实验生物[1-2]Table 1 Experimental organism for new chemical substance registration and pesticide registration[1-2]

注:*未明确毒性的急性或慢性。

Note:*Acute toxicity or chronic toxicity is not specified.

考虑到不同区域物种间潜在的敏感性差异和物种差异,经济合作与发展组织(OECD)等国际组织在编制和发布技术文件时,会将不同成员国提议的代表不同区域的模式生物作为推荐鱼种。如虹鳟(Oncorhynchus mykiss)的最适水温13~17 ℃,热带环境中不宜生长,个体也明显大于斑马鱼(Brachydanio rerio)等常用模式鱼种。但作为北美地区典型的冷水鱼,OECD的化学品测试导则[10-14]还是将其列为推荐鱼种。各国政府更是结合本国的区域特点,大力推进本土模式生物在环境保护中的应用和国际化。如日本开展了大量关于青鳉(Oryzias latipes)的模式生物标准化研究,并在化学品管理法规中明确要求提交青鳉的毒理学测试数据,同时成功地促使OECD[10-17]将青鳉列为多个化学品测试导则的推荐鱼种。美国[18]、澳大利亚[19]等国家提出推导本国水质基准时应使用本土生物的毒理学数据。

1.4 我国化学品环境管理对本土模式生物的要求

我国是化学品生产、使用和国际贸易大国。据《中国现有化学物质名录》(2013版)[21]统计,我国已生产和上市销售的现有化学物质约4.5万种。每年还有100多种年生产或进口数量达到或超过10 t的新化学物质在我国登记注册。

我国国土辽阔,海域宽广,自然条件复杂多样,加之较古老的地质历史,孕育了极其丰富的动植物、微生物和极其丰富多彩的生态组合,是全球12个“巨大多样性国家”之一。我国有7000年以上的农业开垦历史,农民开发利用和培育繁育了大量栽培植物和家养动物,其丰富程度在全世界独一无二。因此,我国的生物多样性在全世界占有十分独特的地位[20]。

为了预防化学品对我国本土生物的危害,我国化学品环境管理非常重视本土生物的毒理学研究。例如,农药登记[3]中家蚕的急性毒性数据是必备资料之一。就工业化学品而言,《新化学物质环境管理办法》[22](国家环境保护总局令第17号) 2003年颁布伊始就对此方面做出了明确要求。办法第八条规定:“新化学物质的生态毒理学数据必须包括在中国境内用中国的供试生物完成的测试数据”。第十二条规定:“已经列入4个以上其他国家或者区域经济一体化组织现有化学物质名录的新化学物质,申报时仅需提供申报表和在中国境内完成的生态毒理学测试报告”。换言之,对于多个国家已生产的新化学物质,有些毒性数据可以不提供,但在中国境内完成的生态毒理学测试数据不可缺少。修订后的《新化学物质环境管理办法》(环境保护部令第7号)不再区分是否已列入4个以上其他国家或者区域经济一体化组织现有化学物质名录,一律要求提交相关测试报告,同时再次强调了本土生物的测试要求。其第十条规定常规申报“生态毒理学特性测试报告必须包括在中国境内用中国的供试生物按照相关标准的规定完成的测试数据”。第十二条规定简易申报基本情形应当提交“在中国境内用中国的供试生物完成的生态毒理学特性测试报告”。可见法规对本土生物毒理性研究的重视。

2 稀有鮈鲫在我国化学品环境管理中的应用(Applications of Gobiocypris rarus in Chinese chemical environment management)

2.1 稀有鮈鲫是我国化学品环境管理中指定的主要本土模式生物

一方面水环境污染倍受重视,鱼类在生物进化和生态系统食物网中具有重要地位,另一方面水生生态毒理学、特别是鱼类测试技术最为成熟。因此,化学品申报登记中对水环境、特别是鱼的数据要求最多。关于新化学物质申报登记中要求的本土生物,2004年新化学物质申报登记受理机构原国家环境保护总局化学品登记中心发布的《新化学物质申报指南(第一版)》[23]和2010年环境保护部发布的《新化学物质申报登记指南》[1]均明确指出:“中国的供试生物是指在我国境内培育繁殖、符合技术要求、用于特定实验的生物。包括稀有鮈鲫、剑尾鱼和斑马鱼、活性污泥等”。换言之,就新化学物质申报而言,稀有鮈鲫是指南中指定的首选本土模式生物。

2.2 稀有鮈鲫应用于我国化学品环境管理的过程

作为配合新化学物质申报登记制度实施的技术文件,2004年原国家环境保护总局发布了环境保护行业标准《化学品测试导则》(HJ/T 153—2004)。《化学品测试方法》是该导则规范性引用的文件之一,主要参照OECD化学品测试系列导则,编录了化学品理化特性、生物系统效应、降解与蓄积、健康效应4个方面的标准测试方法,2004年第一次出版[24],2013年第二版[25]。在该书之前,1990年原国家环境保护局曾组织编写了《化学品测试准则》[26],主要也是参照OECD的导则编录了4个方面的测试方法。以下分别简称《1990版准则》、《2004版方法》和《2013版方法》。

《1990版准则》、《2004版方法》和《2013版方法》编录的方法中对实验生物大多给出了推荐性物种。以最常用的鱼类急性试验为例,《1990版准则》的鱼类急性试验方法中没有推荐稀有鮈鲫,《2004版方法》将稀有鮈鲫作为第二推荐鱼种,《2013版方法》中稀有鮈鲫成为第一推荐鱼种(表2)。由此可见,我国化学品环境管理中应用本土模式生物、特别是稀有鮈鲫的发展过程。早期,虽然管理上有意应用本土模式生物,但限于基础研究的空白,只能推荐鲢、草鱼、鲤等常见家鱼而非规范的实验鱼种。21世纪初,基于水生态毒理学的快速发展和我国对实验生物的重视,剑尾鱼(Xiphophorus helleri)和稀有鮈鲫[7,27]的基础研究取得了一定进展,但离成熟和标准化尚存很大距离,因此在推荐它们的同时将国际公认的斑马鱼(Brachydanio rerio)作为第一推荐鱼种。近年来,随着稀有鮈鲫基础研究的不断深入和新化学物质申报登记制度的大力推动,稀有鮈鲫作为本土模式生物的标准化研究得到长足发展,相关毒理学试验也持续规范,化学品测试方法更新出版,国家标准《化学品稀有鮈鲫急性毒性试验》(GB/T 29763—2013)[28]颁布实施,稀有鮈鲫作为首选推荐鱼种的条件也就日益成熟。

2.3 稀有鮈鲫作为首选模式生物的优势

在保留国际公认的享有“脊椎动物中的果蝇”盛誉的斑马鱼,推荐在我国研究较早、其RR-B(红眼红体)已通过全国水产原种和良种审定委员会审定的剑尾鱼(Xiphophorus helleri)[27]作为我国化学品环境管理推荐鱼种的同时,将稀有鮈鲫作为首选本土模式生物的主要原因是稀有鮈鲫的诸多优势。

稀有鮈鲫属于我国鱼种最丰富的鲤形目鲤科,温水性鱼类,对温度的适应范围很广,分布于长江上游,更能代表我国的物种和环境特性。稀有鮈鲫卵生、产卵间隔短、产卵量大、孵化周期短、卵膜透明、卵膜径较大,这些繁殖特性[4-5]使其更适合用作鱼类早期生活阶段毒性试验和鱼类胚胎-卵黄囊吸收阶段的短期毒性试验等一些以鱼体特定生命阶段为模式生物的实验用鱼(剑尾鱼因为卵胎生而不宜作为这2项试验的实验鱼种)[25]。

2.4 稀有鮈鲫的应用取得较大进展

经过20多年的科学研究和10多年的管理推动及实际应用,稀有鮈鲫作为本土模式生物取得了很大发展。(1)稀有鮈鲫的毒理学数据逐年增多。目前仅就新化学物质申报每年提交的稀有鮈鲫的毒性数据就有几百个。(2)用途扩大、数据类型逐步丰富。用于化学品测试外,稀有鮈鲫也被用于水和废水监测[29]、纳米材料的毒性测试[30]等。除了常规急性毒性数据,慢性毒性数据、发育毒性、内分泌干扰等方面的毒性数据不断增加[31-35]。(3)测试方法标准化不断加强。国家标准《化学品稀有鮈鲫急性毒性试验》(GB/T 29763—2013)[28]已经颁布实施。其他标准,如《化学品稀有鮈鲫幼体生长试验》(国家标准编制项目号20140324-T-469)等正在制订。(4)背景生物学基础研究和品系培育不断突破。目前中国科学院水生生物研究所已完成稀有鮈鲫全基因测序工作,遗传资源包括1个近交系和1个封闭群,封闭群可作为生态毒理学测试的种源[36-38]。(5)稀有鮈鲫的应用范围正在扩大。稀有鮈鲫虽然产于长江上游,但对温度的适应范围很广,得到了分布在我国东、西、南、北不同地区的不同测试机构的广泛应用。

表2 不同版本鱼类急性毒性试验方法的推荐鱼种[24-26]Table 2 Recommended fishes in different versions of method of fish acute toxicity test[24-26]

注:*原文未列出鱼的拉丁学名。

Note:*The fish's Latin names are not listed.

3 进一步发展化学品环境管理本土模式生物的建议(Advices about developing the native model organisms for Chinese chemical management)

3.1 促进稀有鮈鲫列入OECD和ISO导则标准的推荐鱼种

OECD和国际标准化组织(ISO)在技术引领和标准化方面的全球影响力极大。前者推出了化学品测试系列方法[10-17],后者推出了多项鱼类水质测试标准方法[39-41]。这些测试方法及其中推荐的实验鱼种均为各国政府和学界业界所公认。目前我国是ISO的正式成员国,尚未加入OECD,而是以观察员身份参加OECD相关活动。在模式生物方面,我国应借助OECD 和ISO开展国际合作交流,介绍稀有鮈鲫的全基因测序工作等基础研究及其在环境保护、化学品管理等领域的实际应用,促进稀有鮈鲫列为OECD 和ISO相关导则和标准的推荐鱼种,推动稀有鮈鲫的国际化。

3.2 进一步开展稀有鮈鲫敏感性研究、比对研究和标准化研究

目前已有学者开展了稀有鮈鲫对不同化学品的敏感性研究,也有学者将其与斑马鱼等通用模式生物进行毒性比对研究[38, 42],但作为本土模式生物,如何尽快消除外界疑虑实现国际化,还需增加化学品类别,开展有机物、无机物、生物材料、纳米材料等不同类别的敏感性研究。扩大比对研究范围,开展稀有鮈鲫与斑马鱼、黑头软口鲦、青鳉、剑尾鱼等其他常用模式生物的比对研究,开展不同实验室间的比对研究,开展国家间的比对研究,不断积累测试数据,促进各界对稀有鮈鲫作为化学品环境管理本土模式生物的认知和认可。

《2013版方法》[25]编录的鱼类生物效应试验方法共8项,分别为:203鱼类急性毒性试验、204鱼类延长毒性14 d试验、210鱼类早期生活阶段毒性试验、212鱼类胚胎-卵黄囊吸收阶段短期毒性试验、215鱼类幼体生长试验、229鱼类短期繁殖试验、230鱼类雌激素、雄激素活性与芳香酶抑制性21 d短期筛选试验、234鱼类性发育试验。其中前4项方法将稀有鮈鲫作为首先推荐鱼种,第5项方法将其作为第二推荐鱼种,后3项没有推荐。究其原因,后3项尚不属于我国法规要求的测试数据项目,另一方面稀有鮈鲫的实验动物标准化研究、慢性和内分泌干扰方面的毒理学研究尚未完全成熟。后期还需加强稀有鮈鲫的实验动物标准化研究,开展稀有鮈鲫各生命阶段、各种生物效应测试的标准方法开发。

表3 稀有鮈鲫和剑尾鱼的生物学特性比较[4-5,27]Table 3 Comparison of biological characteristics between Gobiocypris rarus and Xiphophorus helleri[4-5,27]

3.3 成立稀有鮈鲫资源中心,建立养殖基地

目前全球已建成多个斑马鱼资源中心,美国德克萨斯州立大学内建有剑尾鱼基因种质中心,俄勒冈大学建有信息最丰富的斑马鱼信息网[7]。我国于2012年10月在国家重大科学研究计划资助下成立了国家斑马鱼资源中心[43]。而稀有鮈鲫方面,虽然中国科学院水生生物研究所已完成稀有鮈鲫的全基因测序,我国在稀有鮈鲫的遗传标记、生物形态标记、饲养环境及微生物控制等关键领域的研究基本达到了国际上生态毒理学研究模式生物的基本要求,但相比斑马鱼尚存较大差距。未来若能加大投入,开展稀有鮈鲫基因改造,形成不同的遗传品系,建立稀有鮈鲫数据库和资源中心,无疑将对我国稀有鮈鲫研究具有重大意义。同时,若能以封闭群为基础,建立稀有鮈鲫实验生物养殖基地,则一方面可以促进稀有鮈鲫作为实验用鱼的产业化发展,另一方面可以确保生态毒理学、化学品管理等领域对鱼类测试数据在质量和数量上的要求。

3.4 扩大研究范围,筛选更多模式生物

经过近20年的努力,稀有鮈鲫作为我国模式生物的实际应用正在逐步推广,剑尾鱼、红鲫(Carassius auratus red variety)、裸项栉虾鱼(Ctenogobius gymnauchen)、唐鱼(Tanichthys albonubes)等标准水生实验动物化研究方面也取得了可喜成绩[7]。但是,从长远发展而言,我国本土模式生物的研究和应用尚处于起步阶段。相比现有存在的数以万计的化学品和需要保护的丰富的环境生物,这些实验生物品系远远不足。以化学品环境管理中的水环境污染防治为例,若要对某种产量大或毒性大、可能形成较大水环境风险的化学品建立基准,按美国环保局提出的《推导保护水生生物及其用途的国家水生态基准技术指南》,应充分考虑生物多样性,用于推导基准的毒性数据至少涉及3个门、8个科的水生动物[44]。而且理论上环境保护的对象是整个生态系统,化学品环境管理需要针对水体、沉积物、土壤、大气、污水处理厂等不同环境介质分别开展风险评价,因此,尽管我国学者在本土环节动物、水生昆虫等的实验生物筛选方面开展了一些研究[45-49],未来还应根据管理需求,结合科研发展,不断扩大化学品环境管理模式生物的研究范围,加强实验动物标准化,野生动物实验动物化,筛选、培养出更多的类似稀有鮈鲫、家蚕(Bombyx mori)那样的本土模式生物。

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Needs and Application of Native Model Organisms for Chinese Chemical Management

Zhou Hong*, Guo Linlin, Lu Ling, Ge Haihong, Gao Yingxin

Solid Waste and Chemicals Management Center, Ministry of Environmental Protection, Beijing 100029, China

26 November 2016 accepted 4 February 2017

Suitable experimental organisms and a lot of ecotoxicological data are bases of chemical environmental management. Native model organisms are very important to Chinese chemical environmental management. Gobiocypris rarus has become the first preferred native model organism recommended for Chinese chemical environmental management. It is necessary to make Gobiocypris rarus well-known to the world by carrying out international cooperation and further studies on genetics, standardization, sensitivities and comparison, etc. Native model organisms can be well developed and adopted only when scientific research is combined with sound management.

chemical; Gobiocypris rarus; model organism; native organism; environment management

国家“863计划”课题(2012AA06A301,2013AA06A308)

周红(1968-),女,硕士,研究方向为化学品环境管理技术,E-mail: zhouhong@mepscc.cn

10.7524/AJE.1673-5897.20161126005

2016-11-26 录用日期:2017-02-04

1673-5897(2017)2-011-09

X171.5

A

周红(1968—),女,硕士,研究员,主要从事化学品环境管理技术研究,已发表论文20余篇。

周红, 郭琳琳, 卢玲, 等. 中国化学品环境管理对本土模式生物的需求和应用[J]. 生态毒理学报,2017, 12(2): 11-19

Zhou H, Guo L L, Lu L, et al. Needs and application of native model organisms for Chinese chemical management [J]. Asian Journal of Ecotoxicology, 2017, 12(2): 11-19 (in Chinese)

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