王阳++林鹏程++明升平++许敏++拉琼

摘要：为比较掌叶大黄、喜马拉雅大黄、菱叶大黄、头序大黄4种高山药用大黄中蒽醌类成分含量的差异，采用紫外分光光度法，以大黄素为对照品，0.5%醋酸镁-甲醇溶液为显色剂，测定了样品溶液在510 nm处的吸光度。结果表明，4种大黄中总蒽醌和结合蒽醌的含量为喜马拉雅大黄>掌叶大黄>菱叶大黄>头序大黄，游离蒽醌的含量为喜马拉雅大黄>掌叶大黄>头序大黄>菱叶大黄，与藏药用大黄的等级划分基本一致。

关键词：掌叶大黄；喜马拉雅大黄；菱叶大黄；头序大黄；蒽醌；测定

中图分类号：R914 文献标识码：A 文章编号：0439-8114（2017）10-1945-02

DOI：10.14088/j.cnki.issn0439-8114.2017.10.036

Quantitative Determination of Anthraquinones in Four High-mountain

Medicinal Species of Rheum

WANG Yang1，LIN Peng-cheng2，MING Sheng-ping1，XU Min1，LA Qiong1

（1.Institute of Biodiversity & Geobiology， Department of Life Sciences， Tibet University， Lhasa 850000， China；

2.College of Pharmacy， Qinghai Nationalities University， Xining 810000，China）

Abstract： To compare the differences between the content of anthraquinones in Rheum palmatum L.，Rheum webbianum Royle，Rheum rhomboideum A. Los. and Rheum globulosum Gage，adopt ultraviolet spectrophotometry，emodin as the reference substance，0.5% magnesium acetate-methanol solution as the chromogenic agent，determined the absorbance of sample solution at 510 nm. The results show that the content of total anthraquinones and conjugated anthraquinones in the four high-mountain medicinalspecies of Rheum were Rheum webbianum Royle>Rheum palmatum L.>Rheum rhomboideum A. Los.>Rheum globulosum Gage，the content of free anthraquinone in the four high-mountain medicinal species of Rheum wsa Rheum webbianum Royle>Rheum palmatum L.>Rheum globulosum Gage>Rheum rhomboideum A. Los. The classification of the four high-mountain medicinalspeices of Rheum are basically the same with traditional Tibetan medicine classification.

Key words：Rheum palmatum L.； Rheum webbianum Royle； Rheum rhomboideum A. Los.； Rheum globulosum Gage； anthraquinones； determination

大黄为中国传统的药材，在藏药中也有广泛的应用，具有泻热通肠，凉血解毒，行瘀化积，活血的功效[1]。青藏高原为大黄属（Rheum）的分布中心[2]，有26种大黄属植物[3]。藏药用大黄根据药性的强烈、温和、逊次分为上（君姆扎）、中（曲什扎）、下（曲玛孜）三品[3]。大黄的化学成分复杂，主要活性成分为蒽醌类衍生物[4]，其中大黄素等游离蒽醌有明显的抗菌、抗肿瘤的功效[5]，结合蒽醌是大黄的主要致泻成分[6]。为了比较上品、中品和下品大黄有效成分含量间的差异，选取了具有代表性的4种藏药用大黄：掌叶大黄（Rheum palmatum L.），上品大黄[7]，也为正品大黄[8]，生于海拔1 500～4 400 m山坡或山谷湿地[9]，根及根茎可入药，具有清热泻火等功效[8]；喜马拉雅大黄（Rheum webbianum Royle），上品大黄[10]，生长于海拔3 500～4 660 m的山坡地带[9]，藏语名为君姆扎，主治培根病引起的热性病[11]；菱叶大黄（Rheum rhomboideum A. Los.），中品大黄[7]，生长于海拔4 700～5 400 m的山坡草地、草甸、沙砾地生境[9]，藏语名为曲什扎，有治疗赤巴病的功效[11]；头序大黄（Rheum globulosum Gage），下品大黄[12]，生于海拔4 500～5 000 m山坡沙砾地或河滩草地[9]；藏药名为曲玛孜，其全草有主治黄水病的功效[13]。

本试验通过研究其根部中蒽醌类成分的含量，以期从有效成分含量的角度探讨藏药用大黄等级划分的合理性。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 仪器 T6型紫外可见分光光度仪（北京普析通用仪器有限责任公司），XPE电子分析天平（METTLER TOLEDO公司MS205DU型），回流提取装置（德国behr Labor-Technik），PHS-3C型酸度计（江苏电分析仪器厂）。

1.1.2 试剂 醋酸镁、甲醇、乙醇、硫酸、三氯甲烷均为国产分析纯试剂。大黄素对照品（批号MUST-13022716，中国药品生物制品研究所）。

1.1.3 测试样品 大黄药材样品（表1）均由西藏大学生命科学系拉琼教授鉴定。样品阴干，粉碎至中粉，避光冷藏备用。

1.2 方法

1.2.1 对照品溶液的制备 精密称量大黄素对照品1.61 mg，加0.5%醋酸镁-甲醇溶液溶解，转移并定容至25 mL容量瓶中，得到含大黄素0.064 4 mg/mL的对照品溶液，备用。

1.2.2 样品溶液的制备

1）游离蒽醌供试溶液的制备。分别精密称量0.5 g样品（过40目）粉末，置于500 mL圓底烧瓶中，加适量氯仿加热回流提取至无色，冷却后，将提取液过滤定容至50 mL容量瓶中。分别精密吸取掌叶大黄提取液、喜马拉雅大黄提取液、头序大黄和菱叶大黄提取液1 mL，加热挥去氯仿，用0.5%醋酸镁-甲醇溶液溶解并定容至10 mL容量瓶中，摇匀备用。

2）总蒽醌供试溶液的制备。分别精密称量0.5 g样品（过40目）粉末，置于500 mL圆底烧瓶中，加乙醇回流提取2 h，冷却后，将提取液过滤定容至100 mL容量瓶中。精密吸取上述溶液10 mL置500 mL圆底烧瓶中，加热去乙醇，加入20 mL硫酸溶液（2.5 moL/L）加热回流1.5 h，待冷却后加氯仿20 mL，加热回流2 h，冷却后转移至分液漏斗中，用氯仿清洗圆底烧瓶，并入分液漏斗，分离油层和水层，水层继续用少量氯仿洗涤4次并入油层，并用少量去离子水洗涤数次至油层为中性为止，然后置于50 mL容量瓶中，加氯仿稀释至刻度，摇匀。分别精密吸取掌叶大黄、喜马拉雅大黄、头序大黄和菱叶大黄提取液2 mL，加热挥去氯仿，用0.5%醋酸镁-甲醇溶液溶解并定容至10 mL容量瓶中，摇匀备用。

1.2.3 最大吸收波长选择 取大黄素对照品溶液适量，在400～600 nm波长扫描。结果显示，大黄素对照品溶液在510 nm处有最大吸收，选510 nm为检测波长。

1.2.4 样品测定 分别取供试品溶液适量，用紫外可见分光光度计以0.5%醋酸镁-甲醇为空白，在510 nm处测定吸光度。分别计算各个样品中游离蒽醌与总蒽醌的含量，结合蒽醌含量=总蒽醌含量-游离蒽醌含量。

2 结果与分析

2.1 方法学考察

2.1.1 标准曲线的绘制及线性关系考察 精密吸取大黄素对照品溶液0.5、1.0、2.0、4.0、6.0、8.0、10.0 mL，分别置于10 mL容量瓶中，加0.5%醋酸镁-甲醇溶液至刻度。以0.5%醋酸镁-甲醇溶液为空白，分别测定各溶液在510 nm处的吸光度（A）。以浓度（C）为横坐标，吸光度（A）为纵坐标，绘制标准曲线。得到回归方程：A=0.059 92C+0.000 41（r=0.999 7），线性范围为3.22～64.40 μg/mL。标准曲线见图1。

2.1.2 精密度试验 取大黄素对照品溶液，在510 nm处测定吸光度，RSD为0.19%（n=6），表明该方法精密度良好。

2.1.3 稳定性试验 取大黄素对照品溶液，每隔2 h在510 nm处测定吸光度，共测5次，RSD为0.16%，表明吸光度在10 h内稳定，该方法稳定性较好。

2.1.4 回收率测定 精密称取3份喜马拉雅大黄，每份0.01 g，分别加入大黄素对照品0.95、1.19、1.44 mg，供试液并在510 nm处测定吸光度，平均加样回收率为97.6%，RSD为0.23%。

2.2 样品含量测定

分别取供试品溶液适量，用紫外可见分光光度计以0.5%醋酸镁-甲醇为空白，在510 nm处测定吸光度。分别计算各个样品中游离蒽醌与总蒽醌的含量，测定结果见表2。4种大黄中总蒽醌和结合蒽醌的含量为喜马拉雅大黄>掌叶大黄>菱叶大黄>头序大黄，游离蒽醌的含量为喜马拉雅大黄>掌叶大黄>头序大黄>菱叶大黄，与藏药用大黄的等级划分基本一致。

3 小结

4种大黄中总蒽醌和结合蒽醌的含量测定结果与藏药用大黄的等级划分基本一致。其中，喜马拉雅大黄中总蒽醌和游离蒽醌的含量尤其高，其总蒽醌含量为掌叶大黄的1.80倍，游离蒽醌含量高达掌叶大黄的2.36倍。喜马拉雅大黄中蒽醌类成分的含量均优于正品掌叶大黄，但由于其生长于高海拔地区，采集困难，产量不如掌叶大黄，不能大范围推广和应用。因此，传统上可能不被重视，下一步应进一步重视喜马拉雅大黄的应用研究和开发价值。相比之下，掌叶大黄分布范围广，产量高、易栽培、有效成分含量高，所以掌叶大黄作为正品大黄沿用至今是有道理的。菱叶大黄和头绪大黄中蒽醌类成分的含量要明显低于掌叶大黄，头序大黄中结合蒽醌的含量还不足掌叶大黄的1/10，所以其泻下作用较弱，药性平温。

参考文献：

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