杜晓鹏 ， 毛爱国 ， 徐 陶 ， 张 垚 ， 唐树生

(公安部昆明警犬基地 ， 云南昆明650204)

云南某犬场犬狂犬病灭活疫苗免疫抗体效价评估

杜晓鹏 ， 毛爱国 ， 徐 陶 ， 张 垚 ， 唐树生

(公安部昆明警犬基地 ， 云南昆明650204)

采用直接免疫荧光病毒中和试验(FAVN)，对云南某犬场狂犬病灭活疫苗免疫28 d后的犬群随机抽样44只(份)，检测血清中狂犬病病毒抗体效价。结果显示，44只受试犬，14只阳性(≥0.50 IU/mL)，阳性率31.82%(14/44)；狂犬病灭活疫苗免疫1次的31只受试犬(幼犬14只、训练犬17只)，3只阳性，阳性率9.68%(3/31)；免疫2次及2次以上的13只受试犬(3只训练犬，10只种犬)，11只阳性，阳性率84.62%(11/13)。调查显示，该犬场狂犬病灭活疫苗免疫覆盖率为100%。笔者建议：在犬12月龄前，应进行两次狂犬病灭活疫苗免疫；在幼犬3月龄后进行第1次免疫，间隔1个月后进行第二次狂犬病灭活疫苗加强免疫，消除狂犬病免疫空挡，以后每年进行1次免疫；对于监测过程中，出现血清中和抗体效价低于0.50 IU/mL的犬只，应及时加强免疫1次；并加强犬场周围流浪犬、流浪猫管理。

狂犬病 ； 中和抗体 ； 效价 ； 评估

Corvesponding author:TANG Shu-sheng

狂犬病(Rabies)是由狂犬病病毒(Rabiesvirus)感染引起的一种致死性人兽共患病，病死率几乎高达100%。目前，对狂犬病尚无有效的治疗方法，及时接种疫苗是预防狂犬病的最有效措施之一。因此，对动物接种有效的狂犬病疫苗是预防狂犬病最好的办法。

2016年2月，笔者对云南某犬场的犬群进行狂犬病血清中和抗体效价抽样检测，随机抽样犬场内幼犬、训练犬、种犬共44只(份)，以犬免疫后血清中的狂犬病病毒中和抗体效价≥0.50 IU/mL为阳性判断标准[1]，当血清中和抗体效价≥0.50 IU/mL时，犬的抗体可有效保护其免受狂犬病病毒攻击，当低于0.50 IU/mL 时，犬的抗体不能有效保护其免受狂犬病病毒的攻击[2]。结果显示，44只受试犬，14只阳性(≥0.50 IU/mL)，阳性率31.82%(14/44)；狂犬病疫苗免疫1次的31只受试犬(14只幼犬、17只训练犬)，3只阳性，阳性率9.68%(3/31)；免疫2次及2次以上的13只受试犬(3只训练犬、10只种犬)，11只阳性，阳性率84.62%(11/13)。据调查，该犬场幼犬在3月龄后进行第1次狂犬病灭活疫苗免疫，以后每年加强注射1次狂犬病灭活疫苗；种犬及训练犬每年注射狂犬病灭活疫苗1次，其免疫覆盖率为100%。

1 材料与方法

1.1 受试犬 为该犬场正常饲养、受训的幼犬、训练犬和种犬，身体健康、狂犬病灭活疫苗免疫28 d后的犬。幼犬14只，为3月龄以上犬只，进行过第1次狂犬病灭活疫苗免疫；训练犬20只(份)，为6月龄以上犬只，进行过第1次狂犬病灭活疫苗免疫；种犬10只，为18月龄以上犬只，进行过2次以上狂犬病灭活疫苗免疫。

1.2 检测试剂 标准血清：购自国际兽医局(OIE)狂犬病参考实验室，由农业部狂犬病及野生动物与人兽共患病诊断实验室提供。阴性血清：由农业部狂犬病及野生动物与人兽共患病诊断实验室制备并提供。荧光抗体：由农业部狂犬病及野生动物与人兽共患病诊断实验室制备并提供。狂犬病病毒CVS-11细胞毒：由农业部狂犬病及野生动物与人兽共患病诊断实验室提供。待检血清：在受试犬前肢头静脉采血至少3 mL，静置2 h，1 500r/min离心30 min，分离血清，冷冻保存或冷链运输至实验室，备用。出现溶血需重新采取血样并分离血清。

1.3 方法

1.3.1 样本处理 待检血清分别在56 ℃灭活30 min。

1.3.2 检测 采用“直接免疫荧光病毒中和试验(FAVN)”对待检血清中狂犬病病毒抗体效价进行检测，以100 TCID50的狂犬病病毒完全被血清抑制作为判定标准。

具体方法：按照OIE标准操作方法进行，主要操作步骤包括，首先对标准血清和待检血清分别按31，32，33，……312进行稀释；接着在其加入100 TCID50的CVS-11感作1 h后，再加入BHK-21细胞，培养48 h；最后丙酮固定后，加荧光标记抗体染色，荧光显微镜下读取结果。以100 TCID50CVS-11的复制完全被抑制(即没有一个荧光细胞)作为最终抑制效价判定结果。根据Spearman-Karber公式计算血清效价。

2 结果与分析

以犬免疫后血清狂犬病病毒中和抗体效价≥0.50 IU/mL为阳性标准，达到或超过0.50 IU/mL即具有效保护水平。结果显示，全部44只受试犬，14只阳性，阳性率31.82%(14/44)；狂犬病灭活疫苗免疫1次的31只幼犬、训练犬，3只阳性，阳性率9.68%(3/31)；狂犬病灭活疫苗免疫2次的3只训练犬，阳性率100%(3/3)；狂犬病疫苗免疫2次以上的10只种犬，8只阳性，阳性率80.00%(11/13)。如表1所示。以下所有数据分析均通过SPSS 19完成。

表1 血清抗体效价检测结果

2.1 犬群总体血清中和抗体效价阳性率 所有受试犬血清中和抗体效价阳性率为31.82%，这些犬具有较高的狂犬病保护性抗体(≥0.50 IU/mL)，可保护其免受狂犬病病毒的感染[4]，而抗体效价低于0.50 IU/mL的犬群则存在一定风险。

2.2 不同年龄阶段群体血清中和抗体效价阳性率 幼犬、训练犬、种犬血清中和抗体效价结果见图1，从图中看出：幼犬中和抗体效价阳性率为7.14%，免疫1次的训练犬为11.76%，短期内2次免疫过的训练犬为100%，种犬为80%；幼犬、训练犬抗体效价平均阳性率低于80%。对4个组别进行卡方检验，结果显示，组别间存在显著性差异(P<0.05)。

图1 不同年龄阶段群体总体血清中和抗体效价检测结果

2.3 血清中和抗体效价与免疫次数的关系 血清抗体效价与免疫次数的关系见图2所示。

图2 血清抗体效价与免疫次数的关系

整理组别数据见表2：免疫1次的犬，血清中和抗体效价阳性率为9.68%(3/31)，免疫2次及2次以上的犬，血清抗体效价阳性率为84.62%(11/13)。对两个组别进行卡方检验，结果显示，组别间存在显著性差异(P<0.05)，说明要使犬产生保护性抗体，需进行2次及2次以上狂犬病灭活疫苗免疫。

表2 血清抗体效价与免疫次数的关系

2.4 短期内二次免疫过的训练犬血清抗体效价情况 第2次狂犬病灭活疫苗免疫28 d后的3只训练犬，血清中和抗体效价阳性率为100%，结果见表3。

表3 第2次免疫28 d后犬血清抗体效价检测结果

2.5 血清中和抗体效价分布范围 所有受试犬，血清中和抗体效价分布范围见图3。其中，最高值10.26出现在加强免疫28 d后的训练犬。

3 讨论

3.1 从该犬场免疫程序及免疫记录分析，犬群狂犬病疫苗免疫覆盖率达到100%。根据国际惯例，犬的狂犬病免疫覆盖率是影响狂犬病在动物间传播和动物传播给人的直接因素，一般情况下，70%以上的犬群实现免疫是全球公认的消除狂犬病的有效方法[3-4]。因此，该犬场已形成犬群与犬群外动物之间的有效屏障。

图3 血清抗体效价分布范围

3.2 在44只受试犬中，仅14只阳性，阳性率31.82%(14/44)；狂犬病灭活疫苗免疫1次的31只受试犬(幼犬14只，训练犬17只)，3只阳性，阳性率9.68%(3/31)，虽然该犬场狂犬病疫苗免疫覆盖率达到100%，但犬群中和抗体效价阳性率低，犬群存在一定风险；免疫2次及2次以上的13只受试犬(训练犬3只，种犬10只)，11只阳性，阳性率84.62%(11/13)，犬群中和抗体效价显著高于狂犬病疫苗免疫1次的犬只，存在显著性差异(P<0.05)。

3.3 本次检测结果与周桂兰的研究结果[5]相似：“连续免疫注射狂犬病灭活疫苗3次以上的犬(免疫间隔1年)，检测26只，血清抗体效价均在0.50 IU/mL以上，全部阳性，阳性率100%；连续免疫注射狂犬病灭活疫苗2次的犬(免疫间隔1年)，检测17只，15头阳性，阳性率88.24%；免疫注射狂犬病灭活疫苗1次的犬，检测24只，15只阳性，阳性率62.50%”。本次检测中，有3只训练犬，第1次检测全部不合格，随后用狂犬病灭活疫苗加强免疫1次，28 d后采血检测，血清抗体效价均大于0.50 IU/mL，其中1只结果在10.26 IU/mL以上，阳性率100%；该犬场种犬每年加强注射狂犬病灭活疫苗1次，有的犬注射狂犬病疫苗在5次以上，其检测阳性率达80.00%(8/10)。因此，为有效控制狂犬病的发生，对于12月龄以下的犬，应进行至少两次的狂犬病灭活疫苗免疫。对于监测过程中，出现血清中和抗体效价低于0.50 IU/mL的犬只，应及时加强免疫1次。

3.4 这次检测结果，44只受试犬仅14只阳性，阳性率31.82%(14/44)，可能的原因是31只受试犬仅完成1次免疫。据调查，该犬场的幼犬在3月龄后进行第1次狂犬病灭活疫苗免疫，6月龄前后投入训练3个月，结束后训练人员将犬带回新的单位，新单位每年进行1次狂犬病灭活疫苗免疫，中间有6～12个月的狂犬病免疫空档。为减少犬只感染狂犬病的风险，建议该犬场在幼犬3月龄后注射第1次狂犬病灭活疫苗后，犬离开犬场前加强1次狂犬病灭活疫苗免疫，以后在新的单位每年度进行1次免疫。3月龄时的免疫起到启动免疫应答的作用，加强免疫则刺激犬只获得保护性免疫力。

3.5 本次检测中，30只受试犬抗体效价低于0.50 IU/mL，其末次免疫时间与检测时间间隔1～12个月；其中间隔时间为1个月的11只犬，其抗体效价维持在0.04～0.38 IU/mL之间，其他19只犬，抗体效价也处于较低水平，在0.04～0.38 IU/mL之间。依据这个结果，笔者建议该犬场犬只在3月龄后的第一次免疫后，间隔1个月后进行第2次狂犬病灭活疫苗加强免疫。

3.6 在大规模犬只养殖中，为减少血清中和抗体效价低带来的感染风险，应对犬场周围的流浪犬、流浪猫加强管理，可以采取捕捉后绝育、注射狂犬病灭活疫苗的方式，减少其无序繁殖以及传播狂犬病的风险；如果流浪犬、流浪猫危害严重，应与当地政府动物疾控部门共同面对解决。

[1] 愈永新.狂犬病和狂犬病疫苗[M].2版.北京：中国医药科技出版社，2009:65.

[2] 魏德友，刘军，朱锡，等. 2007 年北京市丰台区犬只狂犬病病毒抗体效价调查分析[J].中国兽医学报，2008，28(12):1404-1406.

[3] WHO. Expert consultation on rabies (First report) [ J]. Geneva,2004, 13 : 48-58.

[4] Coleman P G , Dye C . Immunization coverag e required to prevent outbreaks of dog rabies[ J]. 1996, 14(3): 185-186.

[5] 周桂兰.犬免疫注射兽用狂犬病疫苗后血清抗体效价的研究及分析[D].北京：中国农业大学，2007.

Evaluation of the efficacy of immune antibody for inactivated rabies vaccine at a dog farm in Yunnan

DU Xiao-peng , MAO Ai-guo , XU Tao , ZHANG Yao , TANG Shu-sheng

(The ministry of public security police dog base in kunming, Kunming 650204, China)

To monitor the serum antibody titer of rabies in a dog farm in Yunnan using the fluorescent antibody virus neutralization test(FAVN)， 44 dogs were randomly sampled 28 days post immunization with rabies vaccine. The results showed that the there were 14 positive samples (≥0.50 IU/mL) in 44 tested dog positive rate was 31.82% (14/44). Injection of inactivated rabies vaccine for once, there were 3 positive samples and the positive rate was 9.68% (3/31) in 31 tested dogs (14 puppies; 17 trained dogs). When vaccination twice or more than twice, 13 tested dogs (3 trained dogs; 10 breeding dogs) contained 11 positive samples and the positive rate was 84.62% (11/13). This investigation showed that rabies inactivated vaccine immunization coverage was 100% in the dog farm. The authors suggest that dogs should be carried out twice with inactivated rabies vaccine before 12 months of age,once at the age of 3 month and the second time at the age of 4 months. Since then, dogs should be immunized once a year. In the case of the neutralizing antibody titer in serum ,if it is lower than that of the 0.50 IU/mL, the dogs should be vaccinated again timely. Moreover, the stray dogs and cats around the dog farms need to be considered in the control and management program.

Rabies ; neutralizing antibody ; potency ; evaluation

2016-11-02

公安部应用创新计划项目(2011YYCXKMJQ166)

杜晓鹏(1965-)，男，副研究员，本科，从事警犬疾病防治工作，E-mail:dxp_2007@163.com

唐树生，E-mail:kmjqjd@126.com

S851.3

A

0529-6005(2017)05-0092-03