鲁梦婷， 薛新梅， 魏 娜， 林德贵

(1.新疆巴音郭楞蒙古自治州动物疾病控制与诊断中心 ， 新疆巴州841000 ； 2.西班牙海博莱生物大药厂股份公司北京代表处 ， 北京海淀100086 ； 3.中国农业大学动物医学院 ， 北京海淀100193)

乌司他丁治疗试验犬急性坏死性胰腺炎的临床观察

鲁梦婷1， 薛新梅1， 魏 娜2， 林德贵3

(1.新疆巴音郭楞蒙古自治州动物疾病控制与诊断中心 ， 新疆巴州841000 ； 2.西班牙海博莱生物大药厂股份公司北京代表处 ， 北京海淀100086 ； 3.中国农业大学动物医学院 ， 北京海淀100193)

为了探讨乌司他丁(尿抑制素 ,Ulinastatin)治疗犬急性坏死性胰腺炎的疗效，为临床治疗犬急性坏死性胰腺炎提供参考依据。选用18只健康试验犬，随机分成3组，分别为对照组，低剂量乌司他丁治疗组和高剂量乌司他丁治疗组。3组试验犬通过改良胰管逆行注射法，造出胰腺炎模型。观察对比3组试验犬的临床症状、血常规、生化、B超影像变化。结果显示：(1)乌司他丁治疗组试验犬精神状态、活动性等较对照组好，呕吐、腹泻较轻，而且临床症状随着用药剂量增加而减轻；(2)乌司他丁治疗组试验犬血常规、生化指标显著低于对照组，而且随用药剂量的增加而降低。结果证明，乌司他丁能有效改善犬重症急性坏死性胰腺炎的临床症状，降低重症急性胰腺炎并发症的发生率，2万 IU/kg体重乌司他丁的治疗效果比1万 IU/kg体重乌司他丁的治疗效果更好。

犬 ； 急性坏死性胰腺炎 ； 乌司他丁 ； 疗效

急性胰腺炎(AP)是犬消化科的常见危急重症，发病急、并发症多、病死率高。临床以急性腹痛、呕吐、发热、血与尿淀粉酶增高为特点。乌司他丁能有效抑制水解酶活性、抗炎和改善循环体质。本试验通过造急性胰腺炎模型，探讨用不同剂量乌司他丁治疗的临床效果，验证了不同剂量乌司他丁对试验犬急性胰腺炎治疗效果的影响。

1 材料与方法

1.1 试验动物 购自北京市沙河利通试验动物养殖中心的杂种健康犬18只，体重9±3 kg，年龄1～3岁，雌雄各半。试验犬随机平均分为3组，用5%牛磺胆酸钠(0.1 mL/kg体重)和胰蛋白酶(3 500 U/kg)的混合溶液，通过改良胰管逆行注射法，造出胰腺炎模型。造模后7 d试验犬禁食禁水。各治疗组在模型构建完成后0.5 h开始静脉滴注，各组动物按照规定治疗每天8:00和20:00给试验犬输液。对照组A组每天两次静脉输注5%葡萄糖氯化钠溶液，B组用1万 IU/kg体重乌司他丁溶于5%葡萄糖氯化钠溶液每天两次静脉输注，C组用2万 IU/kg体重乌司他丁溶于5%葡萄糖氯化钠溶液每天两次静脉输注。每组每天按照0.1 mL/kg体重的剂量皮下注射拜有利。

1.2 样品的采集及处理 3组动物在麻醉前，造模后0.5 h，造模后12 h，24 h，第3天及第7天时，分别在每天第1次输液前采集静脉血，做血常规及生化检验；在造模前以及在试验后48 h及第7天运用B超检测胰腺在形态结构上的变化。

1.3 统计学分析 所用数据均采用GraphPad Prism 4 Project统计分析软件进行分析处理，试验结果用均数±标准差(X±SD)表示。

2 结果与分析

2.1 急性坏死性胰腺炎造模 向主胰管内注入牛磺胆酸钠和胰蛋白酶复合液15 min后可以看到胰腺充血、出血明显；造模后1 d，患犬体温升高，呕吐，拉血红色稀便，腹痛，呈“祈祷”式；在模型构建完成第1天，各模型组与造模前相比，血浆淀粉酶含量差异极显著，达到术前5倍以上，血清脂肪酶含量也达到术前8倍左右，差异极显著；在模型构建完成48 h，各模型组与造模前相比，B超影像显示胰腺边缘不规则增大，回声增强且不均质，包膜不可见；围绕胰腺的肠系膜回声增强，水肿导致低回声的，均一的网状结构中有产回声的小叶组织结构出现；有些犬出现少量腹水。以上结果表明，采用胰管逆行注射法构建急性胰腺炎模型成功，各模型组均构建成功说明了胰管逆行注射法构建的急性胰腺炎模型稳定。

2.2 各组试验犬白细胞变化情况 见表1。

b：A对B差异显著； c：A对C差异显著； d：A对C差异极显著

从表1可以看出，(1)A组白细胞总数在术后 1 d 高于B组(P<0.05)，明显高于C组(P<0.01)，在第3天后达到正常值说明乌司他丁在控制白细胞数目上是有疗效的；(2)两个乌司他丁治疗组之间白细胞总数差异不显著(P>0.05)，说明在控制白细胞数目上1万 IU/kg体重乌司他丁与2万 IU/kg体重乌司他丁的治疗作用相当。

2.3 各组试验犬淀粉酶变化情况 见表2。

表2 各试验组犬只血清淀粉酶含量变化情况 (U/L)

b：A对B差异显著； c：A对C差异显著； a：A对B差异极显著，下表同

血清淀粉酶的含量是检测急性胰腺炎的一个重要生化指标，当血清淀粉酶升高到参考值的3倍以上时，通常提示胰腺炎发生。从表2可以看出，(1)对照组与两组乌司他丁治疗组在术后的24 h到第3天的淀粉酶含量变化差异显著(P<0.05)，表明所有模型组的胰腺炎病理模型构建成功；(2)从各模型组的淀粉酶变化可以看出，急性胰腺炎发生之后，其血清淀粉酶含量是一个先升高后下降的变化过程，在第1天就可以达到峰值，其数值变化升高8倍左右，在第3天到第4天之间缓慢下降，于第7天下降到接近正常值水平；(3)2个治疗组和急性胰腺炎组之间的血清淀粉酶含量差异显著(P<0.05)，说明治疗组所用的乌司他丁对急性胰腺炎发展有抑制作用，但2个治疗组所用药物对急性胰腺炎发展的抑制作用差异不显著(P>0.05)。

2.4 各组试验犬脂肪酶变化情况 见表3。

表3 各试验组犬只血清脂肪酶含量变化情况 (U/L)

血清脂肪酶的含量是检测急性胰腺炎的又一个重要生化指标，脂肪酶一般只有升高到正常的3～5 倍以上，才提示为胰腺炎。从表3可以看出，(1)对照组与两组乌司他丁治疗组在术后的第1天到第3天的脂肪酶含量变化差异显著(P<0.05)，表明所有模型组的胰腺炎病理模型构建成功；(2)从各模型组的脂肪酶变化可以看出，急性胰腺炎发生之后，其血清脂肪酶含量是一个先升高后下降的变化过程，在第1天就可以达到峰值，其数值变化升高10倍左右，在第2天到第4天之间缓慢下降，于第7天下降到接近正常值水平；(3)2个治疗组和急性胰腺炎组之间的血清脂肪酶含量差异显著(P<0.05)，说明各个治疗组所用药物对急性胰腺炎发展有抑制作用，但两个治疗组所用药物对急性胰腺炎发展的抑制作用差异不显著(P>0.05)。

2.5 B超影像学观察 造模前，使用高频探头进行十二指肠段纵向定位扫查，可见正常胰腺右叶质地均匀，边缘清晰的胰腺，胰腺呈细粒状低回声，回声均匀。造模后2 d，对照组胰腺右叶包膜不可见，边缘不规则增大，胰腺边缘分界不清、水肿；7 d后，胰腺实质回声不均匀，有低回声甚至无回声区，也有强回声区并伴有后方声影(如图1)。B组术后2 d，胰腺体积增大，实质回声不均匀；7 d后， 胰腺边缘分界不清、水肿，实质回声不均匀(如图2)。C组2 d后，在十二指肠横切面左侧可探及肿大的胰腺，在十二指肠前曲处可探及右叶胰腺水肿，实质胰腺边缘回声偏高，实质内呈均匀低回声；7 d后，回声较均匀，血流信号较强。

3 讨论

3.1 乌司他丁对急性胰腺炎犬临床症状的影响 在临床症状上，犬的连续呕吐以及腹部疼痛对诊断胰腺炎有很大的帮助。在一篇针对犬的研究中指出，临床症状的严重程度与存在的胰腺炎症状严重程度成正比[1]。造模前，3组犬体温正常、活泼、无呕吐腹泻等症状。造模后，A组有3只试验犬在术后前两天体温高于正常值。3组试验犬术后精神沉郁，主要表现为拱背腹痛，不让碰触腹部，走路缓慢。随着病情的发展，B、C两组试验犬在术后恢复比A组快。3组犬均出现呕吐，A组犬呕吐次数比B组及C组多。A组试验犬在前3 d有4只犬出现腹泻，且其中1只犬出现血样腹泻，B组有2只试验犬造模后第1天出现一过性腹泻，为黏稠状黄色便，C组试验犬造模后无腹泻症状。这说明乌司他丁能有效改善犬化脓性急性胰腺炎(SAP)并发的腹痛、恶心、呕吐、腹泻等临床症状。

图1 A组7 d后B超影像观察

图2 B组7 d后B超影像观察

3.2 乌司他丁对急性胰腺炎犬白细胞的影响 胰腺炎经常伴随炎性白细胞浸润。常多见嗜中性粒细胞增多，伴随杆状核细胞(核左移)和单核细胞增多，尤其在急性严重胰腺炎或者坏死性胰腺炎导致腹膜炎时更常见。核左移伴随白细胞总数升高，表示骨髓造血机能加强，机体处于积极抵抗状态[2]。但白细胞的过度释放，会引起全身炎症反应，再加上胰酶的释放，会进一步加重胰腺炎。通过试验可以看出，3组试验犬在造模后白细胞都高于正常范围，但与乌司他丁治疗组相比，对照组白细胞数量显著升高，表明乌司他丁能有效抑制白细胞过度的表达，减少各种细胞因子和炎性介质的过度释放，阻断血液中炎症的级联反应，避免炎症反应的进一步扩大。

3.3 乌司他丁对急性胰腺炎犬血清淀粉酶、脂肪酶的影响 随着急性胰腺炎的发展，胰腺腺泡细胞不断损伤，胰酶进入间质组织并且吸收入淋巴和血液，引起血清淀粉酶和脂肪酶升高。淀粉酶主要来源于胰腺，几乎所有的血清脂肪酶都来源于胰腺。除了胰腺炎外，还有很多原因都会引起血清淀粉酶的升高，比如肠炎、肠梗阻或肠穿孔。正常情况下，过量的脂肪酶经肾脏滤过。因此，在胰腺疾病的早期阶段，脂肪酶仍处于正常水平。一般情况下，血清淀粉酶升高的同时脂肪酶水平也升高，一般要考虑到胰腺疾病。对于胰腺炎的检测，脂肪酶比淀粉酶更敏感。淀粉酶和脂肪酶活性与胰腺炎的严重程度无直接关系，通常同时检测血液淀粉酶和脂肪酶活性来评估胰腺功能。淀粉酶或脂肪酶一般只有升高到正常的3～5倍(或者更高)才被定义为胰腺炎[1]。

急性胰腺炎发病的特点是胰腺多种酶被激活，导致胰腺组织的自身消化和破坏。乌司他丁作为一种酶抑制剂，具有抑制多种蛋白酶、胰淀粉酶和脂水解酶等的活性，减轻自身消化降低内毒素的吸收，改善微循环及减轻组织的损伤的同时，还能稳定溶酶体膜，防止溶酶体内的水解酶外溢，并能抑制心肌抑制因子的产生，延缓SAP病程发展[3-4]，故乌司他丁具有抑制炎症介质的释放等功能，从多个环节抑制细胞的损伤，保护脏器，治疗全身炎症反应综合征(SIRS)、多器官功能障碍综合征(MODS)。乌司他丁治疗急性胰腺炎的发病机制，除与抑制各种消化酶有关外，还可能具有纠正机体细胞代谢障碍和血液动力学紊乱的作用，从而达到阻止各种胰酶启动的SIRS[5-6]。

本试验中，3组试验犬淀粉酶和脂肪酶都明显升高。在模型构建完成第l天，各模型组与造模前相比，血浆淀粉酶达到术前5倍以上，血清脂肪酶含量也达到术前8倍左右，这提示胰腺炎造模成立。造模后，乌司他丁治疗组淀粉酶升高的幅度明显比对照组升高的小，说明治疗组所用的乌司他丁对急性胰腺炎淀粉酶和脂肪酶的释放有抑制作用。

3.4 乌司他丁对急性胰腺炎B超影像学的影响 在诊断犬急性胰腺炎时，腹部超声是一种非常重要的诊断方法。通过B超图像可以反映出发生胰腺炎时胰腺肿大，实质回声不均，局部回声增强，液体无回声暗区等[7]，根据B超图像推断出胰腺是否发生水肿、坏死、出血等。相比较X线而言，利用B超诊断胰腺炎的准确性更强，达到68%[8]。

本次试验中，通过B超探查发现，三组试验犬在造模后第2天胰腺B超图像均表现为胰腺体积增大，实质回声不均匀，提示犬急性胰腺炎造模成功。而A组输液7天后，胰腺影像图像显示实质有低回声甚至无回声区，也有强回声区并伴有后方声影，提示有局部坏死灶。这可能是由于胰腺坏死，胰腺组织纤维化出现的强回声甚至伴有后方声影；或是因为胰腺实质内出现脓肿而出现无回声区域。这表明了A组正由急性胰腺炎逐渐向慢性胰腺炎转变。7 d后，乌司他丁治疗组的B超影像显示，B组胰腺水肿，实质回声不均匀；C组观察到胰腺体积偏大，实质回声比较均匀。这说明乌司他丁能有效减轻胰腺的坏死程度，缓解急性胰腺炎的症状，且高剂量比低剂量治疗效果好。

乌司他丁作为SAP临床用药，来源于人体，安全性高，能有效改善犬重症急性胰腺炎的腹痛、恶心、呕吐、腹泻等临床症状，降低急性胰腺炎并发症的发生率，2万 IU/kg体重乌司他丁的治疗效果比1万 IU/kg体重乌司他丁的治疗效果更好，在治疗过程中未出现明显毒副反应。

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2016-11-15

鲁梦婷(1983-)，女，兽医师，硕士，从事动物疫病检疫工作,E-mail:10381152@qq.com

林德贵，E-mail:csma@sina.com

S858.292

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0529-6005(2017)05-0087-03