刘廷江， 嵇辛勤， 主 性， 阮 涌， 王修江， 林聪宏，陈 强， 雷 云， 龙丹丹， 胡 焱， 万 彪

(1. 遵义市农业委员会， 贵州遵义563000； 2. 贵州大学动物科学学院， 贵州贵阳550025；3.贵州省动物疫病研究所， 贵州贵阳550025； 4.贵阳黔灵动物医院，贵州贵阳550000)

犬乳腺肿瘤病理组织学观察及ER PR C-erbB-2的表达分析

刘廷江1， 嵇辛勤2，3， 主 性2， 阮 涌2， 王修江4， 林聪宏2，陈 强2， 雷 云2， 龙丹丹2， 胡 焱2， 万 彪2

(1. 遵义市农业委员会， 贵州遵义563000； 2. 贵州大学动物科学学院， 贵州贵阳550025；3.贵州省动物疫病研究所， 贵州贵阳550025； 4.贵阳黔灵动物医院，贵州贵阳550000)

通过对20例犬乳腺肿瘤进行病理组织学观察、免疫组织化学染色，探讨犬乳腺肿瘤病理形态学特点，ER、PR、C-erbB-2表达与乳腺肿瘤的关系。结果显示，20例犬乳腺肿瘤，70%为恶性肿瘤，其中良性肿瘤有导管内乳头状瘤和纤维性瘤，恶性肿瘤有浸润性导管癌，单纯癌，小叶原位癌，癌肉瘤，腺癌，恶性肿瘤发病率高于良性肿瘤。免疫组化结果显示-ER、PR在良性肿瘤的表达率均高于恶性肿瘤，P<0.05，差异显著；C-erbB-2在恶性肿瘤中的表达高于良性肿瘤，P<0.05，差异显著。提示，犬乳腺肿瘤恶性肿瘤发病率较高，ER、PR、C-erbB-2对犬乳腺肿瘤发病中的诊断、治疗及预后有重要意义。

犬 ； 乳腺肿瘤 ； 免疫组织化学

犬乳腺肿瘤是犬机体正常组织细胞在促进因素的长期作用下，产生的细胞增生与异常分化而形成的病理性新生物。是犬类常见肿瘤，发病率较高，占犬肿瘤发生中的50%，母犬发病为主，临床上发病率较高，且结构复杂[1-8]。犬乳腺肿瘤一般为6岁以后多发，平均年龄在9～10岁左右[9-11]。犬乳腺肿瘤的病因、肿瘤组织学特性、药物及手术治疗等与人类的乳腺肿瘤较为相似[12]，因此研究犬乳腺肿瘤是研究人类乳腺肿瘤的最佳切入口之一，它为研究人类乳腺肿瘤病提供了有效的动物模型。随着医疗技术的不断发展，对于犬乳腺肿瘤的诊断技术虽有了很大的提高，但主要以病理切片观察为主，大多数病例并没有得到完全的确诊，在治疗方面公认的治疗主要以手术治疗为主，恶性肿瘤很少采用化疗或放疗等治疗措施，因此常出现癌细胞转移的现象[13-14]。免疫组织化学是乳腺肿瘤研究的一种重要方法，在人类上研究较为成熟，但在犬乳腺肿瘤的研究上报道较少，在国内尚处于起步阶段[15]。在乳腺肿瘤免疫组化研究当中，雌激素受体(ER)、孕激素受体(PR)是一个重要的检测因子，其在犬乳腺组织的发育中有着重要作用，但其表达异常时，也常会引起乳腺肿瘤的发生[13]。

研究报道发现，表皮生长因子受体-2(C-erbB-2)的表达对乳腺癌细胞发生有着一定的影响作用，乳腺癌中C-erbB-2的表达情况，对于患者预后的判断及治疗方式的选择有着重要的意义[16]。因此，本文通过对诊疗过程中获得的犬乳腺肿瘤进行组织学形态观察，将其分类，并用免疫组化法检测ER、PR、C-erbB-2的表达情况，探索其在犬乳腺肿瘤中的表达差异及临床意义。

1 材料与方法

1.1 材料 材料来自贵州大学动物医院，收集于2012年12月至2014年8月共20例，年龄在3～13岁之间，手术取下的肿瘤组织浸泡于4%多聚甲醛固定。免疫组化试剂盒，购自上海江莱生物科技有限公司。

1.2 方法

1.2.1 组织形态学观察 取固定好后的肿瘤组织，石蜡包埋，3～5 μm连续切片，分别进行H.E.染色并分类。

1.2.2 ER、PR、C-erbB-2表达检测 取4%多聚甲醛固定好的组织，采用免疫组化SP方法，DAB显色进行检测，具体操作按照购买试剂盒说明书进行。根据多功能真彩色细胞图象分析管理系统，C-erbB-2蛋白以细胞膜出现棕黄色颗粒为阳性判定标准，ER、PR蛋白均以细胞核出现棕黄色为阳性判定标准进行判读[17]。根据阳性细胞数和着色强度综合计分，阳性细胞数目比例在0%～1%计分为0分，1%～10%为1分，10%～50%为2，50%～80%为3分，80%～100%为4分；着色强度方面计分：不着色为0分，淡黄色为1分，黄色为2分，棕黄色为3分。综合两者评分，≧2阳性[18]。

1.2.3 统计学处理 采用SPSS17.0软件进行统计分析，采用χ2检验相关性分析，P<0.05为差显著具有统计学意义。

1.2.4 组织形态学观察 对收集的20例犬的乳腺肿瘤组织进行切片，结果参照《WHO乳腺肿瘤分类》(第四版)、《中国肿瘤病理学分类》第9分册进行分类[19-20]，共观察到7类乳腺肿瘤，其中恶性肿瘤的发生要高于良性肿瘤，良性肿瘤以导管内乳头状瘤居多，而恶性肿瘤以浸润性导管癌发病较高，发生的肿瘤中可以看到，组织中的细胞和细胞核的大小、形状不一致，细胞杂乱无章的堆积，形成不规则的实性细胞团块、条索、小梁和不规则的腺管、乳头，肌上皮细胞消失，细胞的胞膜和核膜消失，癌细胞突破管泡壁的基底膜向间质及周围组织侵袭性生长，结缔组织增生，大面积的纤维化等(见中插彩版图1)，其分类和比例情况见表1。

表1 犬乳腺肿瘤分类情况

2 免疫组化结果

免疫组化部分表达情况见中插彩版图2、图3、图4、图7、图6、图7。在受体蛋白检测发现(表2)，ER阳性在良性肿瘤中的表达率为83.33%(5/6)，高恶性肿瘤中的表达率为71.43%(10/14)，良性高于恶性肿瘤，P<0.05，差异显著，PR阳性在良性肿瘤中的表达率为50%(3/6)，恶性肿瘤中的表达率C-erbB-2阳性表达良性为16.67%(1/6)，恶性肿瘤表达为35.71%(5/14)，恶性高于良性，P<0.05，差异显著。

表2 乳腺肿瘤中ER,PR,C-erbB-2表达情况

3 讨论

犬乳腺肿瘤是犬发病率较高的一类疾病，发病率有逐渐增高的趋势，其结构较为复杂，恶性程度高，混合性较强，与人类乳腺肿瘤特点有所差异[21]，但有研究表明，人类与犬类的肿瘤生物学反应波谱、肿瘤发生学十分接近，且作为人类伴侣动物与人类的生活条件较为相似，故对人类的乳腺肿瘤研究参考具有重要价值[22]，近年来对犬乳腺肿瘤的关注度也越来越高[23]。犬乳腺肿瘤发病中，恶性肿瘤发病率较高，是造成犬死亡的一个重要因素，在调查的20例乳腺肿瘤当中，14例为恶性肿瘤，是良性肿瘤的两倍，可见犬类乳腺肿瘤发病中恶性肿瘤的发病率较高，同时切片观察中恶性肿瘤癌细胞形成的结构越复杂，其恶性程度就越高，对犬的伤害也越大，死亡率也越高。在送诊的20例病例当中，多数犬发病较为严重，多数犬开始消瘦明显，肿瘤表皮皮肤破溃，犬饮食较差或不吃东西，精神状态很差。而此时诊断的病例多为中晚期，且可能恶性肿瘤已发生转移，直接对治疗恢复情况有严重的影响，常常预后不良，这也是直接造成该病高死亡率的一个重要因素。因此，如何提高乳腺肿瘤的早期诊断效率或寻找出更简便的早期方便适用的诊断技术，是亟待解决的问题，也是一个值得探索的课题。

犬乳腺肿瘤手术治疗是目前比较公认的治疗方法[24]，但并不是所有犬都适用手术治疗，且手术治疗时，疑似转移的情况，常需要后期进行辅助治疗，这就需要医生对肿瘤的发病情况和预后情况更加准确的把握。乳腺机体生理学反应当中，雌激素受体ER和孕激素受体PR分别是雌激素与孕激素的特异性结合蛋白[25]，通过雌激素与孕激素二者的共同协调作用，维持乳腺组织的正常发育，同时，二者作用的结果也会使乳腺癌发病的危险性增加，在乳腺肿瘤当中ER、PR对其预后判断和治疗都具有重要意义[26-27]，本试验当中，ER、PR在良性肿瘤中的阳性表达均大于恶性肿瘤，且差异显著，因此，一般情况下，雌激素受体、孕激素受体阳性表达的肿瘤常预后较好，但雌激素受体、孕激素受体不表达或表达量过高时也常提示乳腺肿瘤的恶性程度高，分化差，对治疗的好转率有严重的影响，这与相关研究报道一致[28]，故ER、PR对犬乳腺肿瘤的预后及治疗具有一定的指导意义。

表皮生长因子受体2(C-erbB-2)的活性对调节细胞增殖及分化至关重要[29]。在正常乳腺组织中一般不表达或者微表达[30]，是乳腺癌重要的预后和预测性分子标记物，也是一个重要的乳腺肿瘤治疗靶位[31-32]，本试验中C-erbB-2阳性在恶性肿瘤中的表达高于恶性肿瘤，有明显差异性，免疫组化观察结果发现，当乳腺肿瘤的恶性程度较高时，C-erbB-2的表达量也较高，人乳腺癌C-erbB-2表达与肿瘤分化及淋巴转移有关系[33]，而在犬中是否存在相同关系需要进一步研究，不过本试验中发现， C-erbB-2的阳性表达对乳腺肿瘤的预后不是太好，有研究报道，当ER、PR、 C-erbB-2均不表达时常预后更差，治疗效果并不是太好[34]，可见对犬乳腺肿瘤的预后指标不应单一来看，还需结合多个指标和综合病情来具体分析，因此C-erbB-2时表达情况对犬乳腺肿瘤的预后和治疗方案均有一定的指导意义。

4 结论

犬乳腺肿瘤危害犬生命较为严重的一种疾病，临床发病情况中恶性肿瘤高于良性肿瘤，在该病的诊疗过程中，ER、PR阳性表达的肿瘤常预后较好，C-erbB-2的阳性表达对乳腺肿瘤的预后不是太好，虽然随着医疗技术的不断进步，各种先进的诊疗器械不断应用于诊断治疗，且治疗方案在不断完善，但该病的高发病率和致死率依然没有得到很好的控制，这就需要我们兽医工作者不断的研究和探索，以达到的早诊断、早治疗及根治的效果。

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Histopathological observation and C-erbB-2, Estrogen and Progesterone receptor expression in canine mammary tumor

LIU Ting-jiang1, JI Xin-qin2,3, ZHU Xing2, RUAN Yong2, WANG Xiu-jiang4, LIN Cong-hong2, CHEN Qiang2, LEI Yun2， LONG Dan-dan2，HU Yan2， WAN Biao2

(1.Zunyi Agriculture Committee， Zunyi 563000, China； 2.College of Animal Science， Guizhou University， Guiyang 550025， China； 3.Laboratory for Animal Disease of Guizhou, Guiyang 550025, China； 4.Qian ling animal hospital, Guiyang 550000, China)

In the present study, we detected the expression of ER, PR, and cerbb-2 using the methods of histopathological and immunohistochemical analysis on 20 cases of canine mammary tumors in this paper. Studying the pathological characteristics and the relationship of ER, PR, cerbb-2 on canine mammary tumor. The results showed 70% of the cases had malignant tumors including carcinosarcoma, infiltrative ductal carcinoma, lobular carcinoma in situ, and carcinoma simplex.Benign tumours included intraductal papilloma and fibrous disease, and the incidence was of benign tumors was lower than that of the malignant tumours. In immunohistochemistry, the rate of ER and PR expression sin benign tumours were higher than that in malignant tumors (P<0.05). The malignant tumors were higher than benign tumors in the cerbb-2 expression (P<0.05). It showed that the expressions of ER, PR, and cerbb-2 were important for canine mammary tumor diagnosis, treatment and prognosis

Canine ； mammary tumor ； Immuohistochemistry

JI Xin-qin

2016-09-20

刘廷江(1989-)，男，兽医师，硕士，从事宠物诊疗及畜牧业技术推广工作，E-mail:179471044@qq.com

嵇辛勤，E-mail：jxq972@aliyun.com

S852.35

A

0529-6005(2017)05-0082-03