马鑫，谭松林，邢虎成，2，3*，廖少波

（1.湖南农业大学苎麻研究所，长沙 410128；2.湖南省种质资源创新与资源利用重点实验室，长沙 410128；3.湖南农业大学草业研究所，长沙 410128）

苎麻实时定量 PCR体系的建立

马鑫1，谭松林1，邢虎成1，2，3*，廖少波1

（1.湖南农业大学苎麻研究所，长沙 410128；2.湖南省种质资源创新与资源利用重点实验室，长沙 410128；3.湖南农业大学草业研究所，长沙 410128）

荧光定量 PCR技术目前应用比较广泛，但是 RNA质量、反转录效率、扩增效率和内参基因的选择等都会影响实时荧光定量 PCR技术的准确性。研究以 3个苎麻品种为材料，采用 actin作为内参基因，利用 2个苎麻基因进行实时定量 PCR体系的建立。结果表明，采用试剂盒法提取的 RNA可以满足 RT－qPCR技术的要求，扩增曲线和熔解曲线都符合实验要求，actin基因可以作为内参进行苎麻相对定量分析研究。相对定量分析表明，研究建立的 RT－qPCR方法可以应用于基因表达水平的研究。该研究为实时定量 PCR在苎麻中的应用提供了参考。

苎麻；实时定量 PCR；RNA

荧光定量 PCR技术（也叫 RT－qPCR技术）的概念是在 1992年提出的［1］。1995年，美国 PE（Perkin Elmer）公司开发了 TaqMan荧光探针定量技术，提高了检测的特异性和灵敏度，使荧光定量 PCR 实 现 了 “实时”（real－time）［2］。1996年又 推 出了首 台荧光 定量 PCR检 测系 统，自 此real－time PCR技术才得以真正的推广和应用［3］。实时荧光定量 PCR与传统的定量技术（如半定量 PCR）相比，具有重复性好、特异灵敏、定量准确、操作简便，以及对样品污染小和自动化程度高等优点。该技术现已在基础科学研究、转基因产品和食品安全检测、医学诊断、药物研发、海关检验检疫等科研和实践领域得到广泛应用［2，3－8］。……