尹丽颖+李凤金+仲丽丽+敖鹏+张妍妍+边晓燕+唐丹丽

摘要：目的 探讨辽东楤木叶总皂苷（ETS）诱导人结肠癌HT-29细胞凋亡及其对凋亡相关蛋白表达的影响。方法 MTT法检测不同浓度（6.25、12.5、25、50、100、200 mg/kg）ETS培养的结肠癌HT-29细胞增殖率，Hoechst33258染色和激光共聚焦成像检测细胞凋亡，并观察凋亡细胞的形态学改变，免疫组化检测凋亡相关蛋白Bcl-2、Bax的表达。结果 ETS可诱导HT-29细胞发生凋亡，且凋亡作用在一定范围内呈剂量依赖性；ETS可使HT-29细胞Bcl-2表达降低、Bax表达升高（P<0.05，P<0.01），且呈明显的量效关系。结论 ETS可诱导HT-29细胞凋亡，其凋亡机制可能与降低Bcl-2、升高Bax的表达相关。

关键词：辽东楤木叶总皂苷；HT-29细胞；细胞凋亡；Bcl-2；Bax

DOI：10.3969/j.issn.1005-5304.2017.06.012

中图分类号：R285.5 文献标识码：A 文章编号：1005-5304（2017）06-0049-04

Abstract： Objective To study the apoptosis of human colorectal cancer HT-29 cells induced by Aralia elata Seem leaf total saponin （ETS） and its effects on the expression of relevant proteins. Methods MTT assay was used to detect the proliferation of human colorectal cancer HT-29 cells cultivated with different concentrations （6.25， 12.5， 25， 50， 100， 200 mg/kg） of ETS. Hoechst33258 staining and laser confocal imaging were used to detect the apoptotic cells. Morphological changes were observed. The expressions of Bcl-2 and Bax were detected by immuno- histochemistry. Results ETS could induce apoptosis of HT-29 cells and apoptosis was in a dose-dependent manner in a certain range. ETS could decrease the expression of Bcl-2 and increase the expression of Bax in HT-29 cells （P<0.05， P<0.01）， showing a significant dose-effect relationship. Conclusion ETS can induce the apoptosis of HT-29 cells， and the mechanism may be related to reducing the expression of Bcl-2 and increasing the expression of Bax.

Key words： Aralia elata Seem leaf total saponin； HT-29 cells； cell apoptosis； Bcl-2； Bax

隨着我国人民生活水平的提高，全民的膳食结构发生了重大改变，结肠癌的发病率和死亡率也随之升高[1]。目前除传统手术、放化疗等手段外，中医药治疗结肠癌越来越受到青睐。本课题组前期研究发现，辽东楤木叶总皂苷（total saponine of Aralia Elata Seem leaves，ETS）具有良好的抗肿瘤作用，且对人结肠癌作用效果明显，但其作用机制尚不十分明确[2]。本实验采用MTT法检测人结肠癌HT-29细胞增殖率，通过Hoechst33258染色、激光共聚焦成像等方法检测细胞凋亡，观察ETS对凋亡细胞形态的影响，并用免疫

组化检测凋亡相关蛋白Bcl-2、Bax的表达，探讨ETS对HT-29细胞凋亡的诱导作用及其可能的机制。

1 实验材料

1.1 药物和细胞株

ETS由黑龙江中医药大学药理教研室提供；人结肠癌HT-29细胞株由中国医学科学院基础医学研究所提供。

1.2 主要试剂与仪器

MTT（美国Sigma公司，批号0793）；hyclone PRMI-1640培养基（赛默飞世尔生物化学制品北京有限公司，批号AAJ206662）；胎牛血清（TBD，批号OW20150122-0256）；Hoechst33258荧光染液（碧云天生物技术研究所，批号20131105）；……