关建民++杨书环++刘翠红++张清德++夏天

摘要：目的 研究探讨IL-27在多发性骨髓瘤（MM）不同分期患者中的表达情况，探讨其意义。方法 采用ELISA 检测MM患者及正常对照组血浆中IL-6及IL-27水平。结果 MM D-S I期患者血浆IL-27水平为（51.82±6.01）pg/ml，IL-6水平为（40.02±1.14）pg/ml，II期患者血浆IL-27水平为（55.92±5.31）pg/ml，IL-6水平为（46.99±1.01）pg/ml，III期患者IL-27水平为（60.09±8.01）pg/ml，IL-6水平为（50.54±1.98）pg/ml，明显高于正常对照组[IL-27（8.29±4.41）pg/ml，IL-6（2.08±0.18）pg/ml]（P<0.05），组间比较具有统计学意义。结论 多发性骨髓瘤患者随着病情进展，IL-6/IL-27表达均增高，提示IL-6/IL-27可能与疾病进展有关，提示了不良预后。

关键词：IL-27；多发性骨髓瘤；发病机制

Expression of IL-6/IL-27 in Patients with Multiple Myeloma and its Clinical Significance

GUAN Jian-min1，YANG Shu-huan2，LIU Cui-hong2，ZHANG Qing-de1，XIA Tian2

（1.Heze Medical College，Heze 274000，Shandong，China；

2.Department of Hematology，Heze Municipal Hospital，Heze 274000，Shandong，China）

Abstract：Objective To investigate the expression of IL-27 in patients with multiple myeloma（MM）in different stages，and to explore its significance. Methods The levels of IL-6 and IL-27 in plasma of MM patients and normal controls were detected by ELISA.Results The level of serum IL-27 in patients with MM D-S I for a period of（51.82±6.01）pg/ml，IL-6（level 40.02±1.14）pg/ml，the plasma IL-27 level in patients with stage II（55.92±5.31） pg/ml，IL-6 level（46.99±1.01）pg/ml，IL-27 levels in patients with stage III（60.09±8.01）pg/ml，IL-6 level（50.54±1.98）pg/ml，significantly higher than the normal control group[IL-27（8.29±4.41）pg/ml，IL-6（2.08±0.18）pg/ml]（P<0.05），comparison between groups was statistically significant.Conclusion The patients with multiple myeloma as the disease progresses，the expression of IL-6/IL-27 was increased，suggesting that IL-6/IL-27 may be associated with disease progression，suggesting a poor prognosis.

Key words：IL-27；Multiple myeloma；Pathogenesis

多發性骨髓瘤（multiple myeloma，MM）是一种浆细胞性肿瘤，以骨髓中浆细胞恶性克隆性增生并分泌单克隆免疫球蛋白（M 蛋白）造成骨质损害为主要特征。既往研究发现[1-2]，IL-6细胞因子家族对多发性骨髓瘤的发生、发展及预后均起到较为重要的作用。IL-27是近年发现的一种新的IL-6/IL-12细胞因子家族成员，其在多发性骨髓瘤发病机制中的作用亦逐渐受到重视[3]。目前关于IL-27在多发性骨髓瘤患者中表达情况说法不一，本研究旨在检测不同分期状态下多发性骨髓瘤患者体内IL-6/IL-27表达情况，并探讨其临床意义。

1 资料与方法

1.1一般资料 50例MM患者为2012年3月～2016年2月在菏泽市立医院、菏泽医学专科学校附属医院住院的患者，所有患者均符合国内MM诊断标准[4]。其中男36例，女14例，中位年龄62（40～79）岁。临床分期：DS I期15例，II期20例，III期15例。标本采集时患者均不存在急、慢性感染性疾病及自身免疫性疾病等。

1.2方法 统一应用ELISA方法检测MM患者外周血血浆中IL-6/IL-27水平。患者确诊后于化疗前清晨、空腹采集外周静脉血2～3 ml，肝素抗凝，6 h内室温下2000 rpm/min离心10 min，吸取血浆，分装后储存于-70 ℃冰箱备用。

1.3实验原理 用纯化的IL-6/IL-27抗原包被微孔板，制成固相抗原，往包被单抗的微孔中依次加入IL-6/IL-27，再与HRP标记的IL-6/IL-27抗原结合，形成抗体-抗原-酶标抗体复合物，经过彻底洗涤后加底物TMB显色。TMB在HRP酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。颜色的深浅和样品中的IL-6/IL-27呈正相关。用酶标仪在450 nm波长下测定吸光度（OD值），通过标准曲线计算样品中IL-6/IL-27浓度。具体流程如下：①加样：分别设待测样品孔、标准孔。在酶标包被板上标准品准确加样50 μl，待测样品孔中先加样品稀释液40 μl，然后再加待测样品10 μl（样品最终稀释度为5倍）。加样将样品加于酶标板孔底部，尽量不触及孔壁，轻轻晃动混匀。②温育：用封板膜封板后置37 ℃温育30 min。③配液：将20倍浓缩洗涤液用蒸馏水20倍稀释后备用。④洗涤：小心揭掉封板膜，弃去液体，甩干，每孔加满洗涤液，静置30 s后弃去，如此重复2～3次，拍干。⑤加酶：每孔加入酶标试剂50 μl。⑥温育：操作同②。⑦洗涤：操作同④。⑧显色：每孔先加入显色剂A 50 μl，再加入显色剂B 50 μl，轻轻震荡混匀，37 ℃避光显色10 min。⑨终止：每孔加终止液50 μl，终止反应（此时蓝色立转黄色）。⑩测定：以450 nm波长依序测量各孔的吸光度（OD值）。 测定应在加终止液后15 min以内进行。健康对照组：方法同上，确定无合并急、慢性感染性疾病、自身免疫性疾病等。

1.4試剂 IL-6水平检测采用北京百奥莱博科技有限公司生产的双抗体方法试剂（Sheep interleukin 6，IL-6 ELISA KIT），规格96T/盒。IL-27水平检测采用上海博研生物科技有限公司生产的试剂（human Interleukin 27，IL-27 Elisa KIT），规格，48T/盒 。

1.5统计学处理 采用SPSS 17.0统计软件进行统计处理。数据用（x±s）表示，进行t检验分析。P<0.05认为有统计学意义。

2 结果

MM D-S I期患者血浆IL-27水平为（51.82±6.01）pg/ml，II期患者血浆IL-27水平为（55.92±5.31）pg/ml，III期患者IL-27水平为（60.09±8.01）pg/ml，组间比较具有统计学意义（P<0.05），明显高于正常对照组[（8.29±4.41）pg/ml]（P<0.05）。我们以IL-6为阳性对照，D-S I期MM患者血浆IL-6水平为（40.02±1.14）pg/ml，II期MM患者血浆IL-6水平为（46.99±1.01）pg/ml，III期MM患者血浆IL-6水平为（50.54±1.98）pg/m，明显高于较正常对照组[（2.08±0.18）pg/ml]（P<0.05），见表1。

3 讨论

多发性骨髓瘤（MM）是一类恶性克隆性浆细胞疾病，在血液系统肿瘤性疾病里预后较差，应用化学治疗的疗效欠佳，近年来新型药物的应用及自体干细胞移植等新方法使MM的疾病缓解率有所提高。细胞因子在肿瘤免疫中发挥重要作用，重组细胞因子已成为目前生物治疗中一种重要的治疗制剂，目前IL-2及IL-11等细胞因子已获准用于疾病治疗，一些细胞因子（如IL-12、IFN、TNF）应用于抗肿瘤治疗已经取得一定的效果。IL-12可以诱导Th1细胞，CTL及NK细胞产生IFN-γ进而发挥强大抗肿瘤作用[5]，而严重的副作用限制了IL-12的临床应用。在多发性骨髓瘤患者中，IL-6是骨髓瘤细胞生存生长的关键因子，在疾病进程中，骨髓瘤细胞以及骨髓基质细胞、破骨细胞、成骨细胞等可以同过自分泌以及旁分泌的形式分泌IL-6，从而促进细胞增殖并阻碍细胞凋亡。多发性骨髓瘤患者骨髓基质细胞还可以通过持续的IL-6的生成，以抵抗化疗药物诱导的骨髓瘤细胞凋亡作用。我们的研究可以看出，多发性骨髓瘤患者IL-6的水平中位值在不同分期患者有所不同，分别Ⅰ期约（40.02±1.14）pg/ml，Ⅱ期约（46.99±1.01）pg/ml，Ⅲ期约（50.54±1.98）pg/ml，均明显高于正常对照组患者。本研究显示，IL-6的水平与疾病分期相关，因此IL-6水平可作为评价患者预后的重要指标。体外研究证明[6]，多发性骨髓瘤患者的成骨细胞或破骨细胞，可促进IL-6的大量分泌，而IL-6可反馈性的促进骨髓瘤细胞增殖以及增强骨髓瘤细胞抗凋亡作用。我们期望进一步探讨IL-6在多发性骨髓瘤中的分泌及作用机制的研究，从而为多发性骨髓瘤的临床治疗提供更多理论依据，同时多发性骨髓瘤患者血清IL-6检测标本取材比较方便、价格便宜，作为多发性骨髓瘤患者的常规血清检查，能帮助有效提示患者的病情及预后，为临床治疗提供更多的选择。

IL-27作为一种新发现的IL-6/IL-12家族的细胞因子，是一种由p28和Ebi3组成异源二聚体的新型白介素，它能作用于活化的NK细胞和T细胞，并增强IL-12介导IFN-Y的产生，其抗肿瘤作用是目前所关注的焦点。与其他细胞因子一样，IL-27也与肿瘤息息相关，尤其是人类急性髓系白血病，可直接抑制肿瘤细胞。IL-27抗肿瘤作用已经在多种动物实验模型中得到证实，经过IL-27刺激的肿瘤细胞在实验动物中形成的肿瘤，体积明显缩小，并发现IL-27的抗肿瘤作用主要依赖于有特异性杀伤作用的CD8+T细胞（CTL）和体内其他细胞产生的IFN-γ[7-9]。糖蛋白130（glucoprotein130，gp130）是IL-6 和IL-27受体系统的共享信号转导蛋白β 链，属细胞因子受体超家族的成员，信号传递链gp130 激活是骨髓瘤细胞异常增殖的重要信号，主要通过gp130 而促进骨髓瘤细胞增殖[10-11]。MM作为一种浆细胞恶性肿瘤，IL-27在其发病机制中的作用备受关注[12]。有不同学者研究发现[13]，给小鼠采用两种不同的方法注射两种不同的MM细胞系，重组人IL-27可显著的抑制肿瘤生长，原代MM细胞表面表达功能性的IL-27受体，IL-27通过抑制血管新生显著抑制原代MM细胞和MM系生长，从骨髓瘤患者分选出来的破骨祖细胞亦显著表达IL-27受体，在体外IL-27可直接抑制破骨细胞分化和溶骨活性[14]。目前尚无太多关于IL-27在不同分期MM患者体内表达分泌的报道，且说法不一，因此我们检测了不同分期MM患者中IL-27的表达情况，结果显示MM患者IL-27表达明显高于正常对照组，且随着疾病进展，IL-27表达增高，我们认为，IL-27在多发性骨髓瘤的发病中可能发挥着促进MM细胞增殖、血管新生和破骨细胞活性。IL-27与IL-6在不同时期的MM患者中同样高表达，共享同一受体亚单位gp130，发挥着相同的作用，我们期望进一步探讨IL-27在MM中的分泌及作用机制的研究，从而为为MM的临床治疗提供有关IL-27的更多理论依据，也为MM的临床治疗提供更多的选择。

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编辑/成森