华蟾素注射液对乳腺癌MDA-MB-231细胞E-cad、N-cad表达的影响

2017-06-07许雷来郎雅丽谢璐帆谢小红

浙江中西医结合杂志 2017年2期

许雷来郎雅丽谢璐帆谢小红

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目的观察华蟾素注射液对乳腺癌MDA-MB-231细胞E-cad、N-cad表达的影响，探讨华蟾素注射液对乳腺癌细胞上皮间质转化（EMT）的影响，探讨华蟾素注射液抑制乳腺癌转移机制。方法采用四氮唑蓝（MTT）比色法观察高、中、低剂量华蟾素注射液（100mg/L、25mg/L、6.25mg/L）对MDA-MB-231细胞增殖的影响；实时荧光定量PCR（qRT-PCR）检测法检测MDA-MB-231细胞中E-cad/N-cad mRNA表达水平；蛋白印迹法（Westernblot）检测MDA-MB-231细胞中E-cad/N-cad蛋白表达水平。结果高浓度组华蟾素注射液48h对MDA-MB-231细胞抑制率较中、低剂量组明显（54.54%比50.20%、37.80%），差异有统计学意义（P<0.05），qRT-PCR实验结果显示空白对照组、华蟾素注射液高剂量组、中剂量组、低剂量组E-cad相对表达量依次为（1.05±0.04）%、（8.77± 1.54）%、（3.74±1.56）%、（1.64±0.30）%，N-cad相对表达量依次为（1.18±0.19）%、（0.34±0.19）%、（0.79± 0.20）%、（0.84±0.07）%。华蟾素可以上调E-cad表达，下调N-cad表达，与空白对照组比较差异有统计学意义（P<0.01）。Westernblot结果显示华蟾素注射液能降低N-cad蛋白的表达，上调E-cad蛋白的表达。结论华蟾素能通过上调E-cad表达和下调N-cad表达，抑制MDA-MB-231细胞的上皮间质转化（EMT）转变，从而降低乳腺癌MDA-MB-231细胞的转移能力。

乳腺癌；MDA-MB-231细胞；华蟾素注射液；E-cad/N-cad

乳腺癌是女性最常见的恶性肿瘤之一，乳腺癌经手术治疗后5年内仍然有50%的患者出现复发转移。肿瘤的转移或侵袭是复发转移的主要原因，而其中上皮间质转化（EMT）的发生起到至关重要的作用[1]。EMT过程中主要分子标志的改变包括细胞黏附相关基因E-钙黏蛋白（E-cadherin）表达下调，间叶细胞标志物N-钙黏蛋白（N-cadherin）表达上调[2]。华蟾素注射液主要成分是蟾毒灵和吲哚生物碱等，为干蟾皮的水化萃取物，有研究发现华蟾素对乳腺癌细胞侵袭和转移具有抑制作用[3]，但其作用机制是否与EMT相关尚未见报导。本实验通过观察华蟾素注射液对乳腺癌MDA-MB-231细胞E-cad、N-cad表达的影响，探讨华蟾素注射液抑制乳腺癌转移的作用机制。