谭小兵，刘 佳，郭 宇，徐静舒，戴青原

(1.云南省第一人民医院/昆明理工大学附属医院口腔内科，昆明 650032；2.昆明医科大学第一附属医院心内科，昆明 650032)

论著·基础研究

人牙源性iPSCs 3种培养底物的比较*

谭小兵1，刘 佳1，郭 宇1，徐静舒1，戴青原2△

(1.云南省第一人民医院/昆明理工大学附属医院口腔内科，昆明 650032；2.昆明医科大学第一附属医院心内科，昆明 650032)

目的 对比研究3种人牙源性诱导性多能干细胞(iPSCs)培养底物的特点。方法 使用3种底物培养人牙源性iPSCs：小鼠胚胎成纤维细胞(MEF)、基质胶和重组人玻连蛋白(VTN-N)，对比iPSCs的生长情况。结果 3种底物的制备时间分别为14、3、1 h，三者间差异有统计学意义(P<0.05)；iPSCs重编程时间分别为(30±1.6)、(26±2.1)、(27±1.4)d，其中MEF组明显多于其他两组(P<0.05)；重编程效率分别为0.3%±0.03%、0.56%±0.08%、0.7%±0.02%(P<0.05)。3种底物均能较好支持iPSCs生长，使其保持未分化状态。结论 重组人玻连蛋白无异源性动物组分，制备简便、标准可控、重编程时间较短，是目前理想的支持iPSCs生长的底物。

人诱导性多能干细胞；小鼠胚胎成纤维细胞；基质胶；重组人玻连蛋白

2007年Yamanaka等[1-2]两个独立研究小组先后将转录基因Oct4/Sox2/Klf4/c-Myc或Oct4/Sox2/Nanog/Lin28导入人皮肤成纤维细胞，将其诱导为具有胚胎干细胞(embryonic stem cells,ESCs)性质的细胞，并命名为诱导性多能干细胞(induced pliripetent stem cells，iPSCs)，为干细胞治疗与再生医学研究提供了新的思路[3-6]。iPSCs在形态、细胞倍增能力、类胚体和畸胎瘤形成、分化能力等多方面与ESCs非常相似，在组织再生、疾病模型、个性化治疗等方面具有巨大的应用前景[7-9]。iPSCs应用于临床研究时必须考虑其生物安全性，除了采用非整合性重编程方法(如仙台病毒、质粒载体、mRNAs、蛋白等)进行诱导以外[10]，饲养层底物也是影响iPSCs生物安全性的重要影响因素。人牙髓干细胞(dental pulp stem cells，DPSCs)为间充质干细胞(mesenchymal stem cells,MSCs)来源，一定条件下可分化为脂肪、成骨或软骨系细胞，但与iPSCs相比其增殖和分化能力有限。本研究采用仙台病毒将人DPSCs诱导为iPSCs，观察比较3种培养底物对iPSCs生长的支持程度，筛选符合临床要求的最佳底物。……