孙小涵，张碧成，张强，何孔旺，张雪寒

（1江苏省农业科学院兽医研究所/农业部兽用生物制品工程技术重点实验室， 南京210014；2吉林农业大学动物科学技术学院， 长春130118）

非致病性大肠杆菌鞭毛蛋白对O型口蹄疫病毒的佐剂效果

孙小涵1,2，张碧成1，张强1,2，何孔旺1，张雪寒1

（1江苏省农业科学院兽医研究所/农业部兽用生物制品工程技术重点实验室， 南京210014；2吉林农业大学动物科学技术学院， 长春130118）

【目的】口蹄疫（foot and mouth disease, FMD）的传染性强，传播广，给世界经济和社会发展带来巨大危害，目前疫苗接种仍是主要而有效的防控手段。以增强口蹄疫疫苗免疫效力为目的，基于国内外对鞭毛蛋白佐剂的深入了解与研究，对非致病性大肠杆菌鞭毛进行修饰，研究鞭毛蛋白（flagellin, F）以及有无LTMT佐剂不同重组鞭毛蛋白对口蹄疫病毒(foot and mouth disease virse, FMDV)的佐剂作用。【方法】通过体外表达获得 pCold-F0、pCold-F0-LTMT、pCold-F0NC、pCold-F0NC-LTMT 4种不同重组鞭毛蛋白，用间接ELISA方法检测pCold-F0-LTMT和pCold-F0NC-LTMT蛋白的生物学活性，按照5 μg/只小鼠蛋白量与FMDV灭活抗原混合制备疫苗，同时设置添加或者不添加ISA 206佐剂组，皮下接种Balb/c小鼠，共免疫2次，每次间隔2周。分别于免疫前和免疫后 14、21、28、35和45 d采血并采集小鼠粪便，45 d后取小肠后段，采用阻断ELISA方法检测血清IgG抗体滴度，用间接ELISA方法检测小鼠粪便和肠洗液中特异的分泌性IgA（secretory IgA, SIgA）抗体滴度，以评估免疫效力。【结果】SDS-PAGE 和 Western blot分析表明，4种不同重组鞭毛蛋白成功表达。并用GM l-ELISA方法验证了pCold-F0-LTMT和pCold-F0NC-LTMT的生物学活性，融合蛋白F0-LTMT和F0NC-LTMT保留了与GM l结合能力。动物试验结果表明，疫苗经皮下注射接种后，单独口蹄疫抗原组没有产生明显的抗体水平，而鞭毛蛋白佐剂组比单独的口蹄疫抗原组，IgG滴度高，并且产生sIgA抗体滴度更早、更高。……