王晓慧+张明+任雪丽+黄雅楠+王占诚+时朝辉

摘 要：抗生素抗性基因（antibiotic resistance genes，简写为ARGs）是一种新兴的环境污染物[1]，在我国禽畜养殖业中由于抗生素的大量使用，导致禽畜粪便中ARGs广泛存在，但其在环境中归趋的研究还较少。四环素是我国禽畜养殖业中广泛使用的抗生素，本研究采用分子生物学技术，研究了猪粪便中四环素耐药基因（antibiotic resistance genes，TRGs）的分布以及迁移变化。通过普通PCR定性检测，发现在养猪场各样品中均检测出TRGs。荧光定量PCR检测发现猪粪堆肥中tet（A）和tet（C）基因的含量相比于土壤中的tet（A）和tet（C）的含量均高0～1个数量级，而比新鲜猪粪中的分别低0～3和1～4个数量级。据此推测TRGs在新鲜猪粪、堆肥和土壤中总体呈逐级降低的趋势，堆肥处理有利于TRGs含量的消减。

关键词：四环素耐药基因；猪粪便；堆肥；土壤；PCR；定量PCR

中图分类号 X713；X53 文献标识码 A 文章编号 1007-7731（2017）09-0022-03

Abstract：Antibiotic resistance genes（ARGs）is an emerging environmental pollutants，a large amount of tetracycline in livestock breeding in China，but the migration and fate of drug resistence genes in the environment is still far more enough. This study by using modern molecular biological technology，tetracycline resistance genes（TRGs）in pig manure was studied distribution and migration of change. Through ordinary PCR detection，find TRGs were detected in all samples of pig farms. qPCR detection results showed thatthe tet（A）and tet（C）in pig manure compost are lower 0～3，1～4 logs than in fresh pig manure ，the tet（A）and tet（C）in the soil are lower 0～1 logs than pig manure composting. Presumably TRGs in manure，compost and soil is gradually decreasing trend，composting may be good for decreasing of TRGs.

Key words：TRGs；Pig manure；Compost；Soil；PCR and qPCR

1 前言

由于禽畜養殖中大量抗生素的滥用致使粪便中的ARGs不断增加，当这些粪便作为有机肥施用到土壤中是否会将ARGs传播到土壤环境中，加重土壤环境的污染负荷，进而危害人类健康，这是一个急需解决的问题。因此，本研究以TRGs为代表，对猪粪便、堆肥和土壤中TRGs进行分子生物学研究，探究TRGs随着猪粪便在环境中的迁移归趋，为环境中TRGs的相关研究提供参考依据。

2 材料与方法

2.1 样品采集 本研究的采样地点是在上海市松江区某大型养猪场。

采样时间分别为2015年3月22日，6月28日，9月18日和12月6日，分别记为3月、6月、9月和12月，每次将样品采集后放入冰盒中运回实验室，立即放入-80 ℃冰箱内低温保存。……