刘高米洋潘兴华和法莲陆容刘菊芬何洁王红阳

两种人脐带间充质干细胞源外泌体分离方法的比较

刘高米洋1,2潘兴华2和法莲3陆容4刘菊芬2何洁2王红阳1

目的 探索人脐带间充质干细胞（hUMSCs）来源的外泌体的最佳分离条件并对其进行生物学鉴定。方法 无血清培养法培养hUMSCs，培养上清中收集外泌体，超高速离心法（ult-exo）和沉淀法分离外泌体（pri-exo），Western Blot检测外泌体标志性蛋白CD63、HSP70、HSP90和阴性对照蛋白TAPA1，透射电镜观察分离所得外泌体生物学形态，高清晰质谱分析外泌体包裹蛋白种类。结果 无血清培养法能够在不改变细胞生物学形态的条件下获取hUMSCs源外泌体，透射电镜下可见超高速离心可以获得具有典型双层膜结构的外泌体，大小在100 nm左右，而沉淀法分离所得产物不具有典型的外泌体形态表征，大小在30 nm左右；Western Blot结果表明超高速离心法所得外泌体CD63、HSP70、HSP90均呈现阳性，阴性对照蛋白TAPA1呈现阴性，沉淀法只能检测到HSP90；高清晰质谱检测出超高速离心法分离所得外泌体有169种蛋白，沉淀法有102种，共有蛋白79种。结论 超高速离心法和沉淀法所得外泌体在蛋白标志物、生物学形态和内含蛋白种类均有差别，本实验结果提示分离hUMSCs源外泌体超高速离心法优于沉淀法。

脐带； 间质干细胞； 外泌体； 分离； 鉴定

间充质干细胞（mesenchymal stem cells，MSCs）是一种来自中胚层间充质，具有多向分化潜能的成体干细胞，主要存在于全身结缔组织和器官间充质[1-2]中。人脐带间充质干细胞（human umbilical cord mesenchymal stem cells，hUMSCs）从分娩后的废弃组织脐带中分离和培养，脐带中的华通氏胶不但含有丰富的MSCs，且其来源的细胞在形态学、扩增能力、分化功能以及表面标志物等生物学鉴定结果都符合间充质干细胞的标准[3]，是目前最具有转化应用前景的间充质干细胞。……