张志勇+阳静+齐泽民

摘要：针对铁皮石斛富含多糖、多酚等次生代谢物质的特点，以铁皮石斛叶片为材料，比较改良AB-LiCl法、SDS法以及试剂盒法提取总RNA的质量，利用电泳检测、核酸蛋白仪浓度测定、RT-PCR等进行验证分析。结果表明，3种方法均能提取铁皮石斛叶片中总RNA，但提取效果存在差异。改良AB-LiCl法提取总RNA的28S和18S条带清晰、D600 nm/D280 nm与D260 nm/D230 nm分别为1.96和2.03，RNA完整性好、纯度高，RNA浓度在3种方法中最高，达到560.6 mg/L，RT-PCR扩增出目的基因片段条带最明显，适用于后续的分子生物学研究。

关键词：铁皮石斛；总RNA；多糖；AB-LiCl法

中图分类号： Q522；S567.23+9.01文献标志码： A

文章编号：1002-1302（2017）04-0033-02

铁皮石斛（Dendrobium officinale Kimura et Migo）为兰科石斛属多年生草本植物，为2010年版《中华人民共和国药典》收载的名贵中药材品种。其干燥鳞茎入药，具有滋阴清热、益胃生津、增强免疫力、降血脂、降血糖、抗氧化、抗衰老等多种药理和保健作用，是石斛属中最为珍稀名贵的种，位列“中华九大仙草”之首[1-3]。对铁皮石斛的研究主要集中在化学成分[4]、药理和临床作用[1，5-6]、分类鉴定[7-8]、诱变育种[9-10]、组织培养及栽培技术[11-13]等方面。随着研究的深入，对铁皮石斛药用有效成分关键基因克隆和相关代谢调控网络的分子机理解析越来越受到研究者的重视。高质量RNA提取是基因克隆及其功能分析等分子生物学研究的前提，常用的RNA小量提取方法有SDS酚法[14]、异硫氰酸胍法[15]、AB法[16-18]等。铁皮石斛茎叶中富含多糖、酚类及生物碱等多种次生代谢产物[19]。尤其多糖多酚不易与RNA分离而共沉淀，影响RNA的质量，不利于后续分子生物学试验的开展。……