苗雨润, 宋庆凯, 匡德宣, 陈玲霞, 尹博文, 李晓飞, 代解杰

(中国医学科学院/北京协和医学院, 医学生物学研究所树鼩种质资源中心,云南省重大传染病疫苗研发重点实验室, 昆明 650118)

树鼩角膜原代上皮细胞的分离培养、纯化与鉴定

苗雨润, 宋庆凯, 匡德宣, 陈玲霞, 尹博文, 李晓飞, 代解杰

(中国医学科学院/北京协和医学院, 医学生物学研究所树鼩种质资源中心,云南省重大传染病疫苗研发重点实验室, 昆明 650118)

目的 建立树鼩角膜上皮细胞(CECs)稳定的体外培养技术，为人类角膜疾病研究提供新的实验材料。方法 使用改进的双酶消化法取得树鼩CECs, 用转化生长因子-β(TGF-β)抑制剂配合梯度消化对树鼩CECs进行纯化，角蛋白3/12抗体对CECs进行免疫荧光检测及鉴定。结果 优化的酶消化法可以快速、有效得到高纯度的树鼩CECs。TGF-β 抑制剂及梯度消化法可以达到良好的纯化目的，纯化的CECs在传代过程中仍保持良好形态。树鼩CECs免疫荧光染色显示角蛋白3/12单克隆抗体阳性。结论 成功建立了一种有效、简单、经济适用的树鼩角膜上皮原代细胞的体外培养技术，所获得的原代细胞具有较好的上皮细胞形态特征并可以连续传代，为眼科疾病的研究提供一种新材料。

树鼩; 角膜上皮细胞(CECs); 原代培养; 优化; 鉴定

角膜细胞的成功培养是近年来角膜病研究与治疗的基础，随着研究进展的日渐深入，对角膜细胞的培养提出了更高要求。近年来，随着细胞体外培养技术的发展, 体外构建生物工程角膜进行移植成为治疗角膜病新趋势，其中高质量的角膜上皮种子细胞是构建生物工程角膜并成功移植的重要影响因素[1]。……