中生菌素对贵州烟区烟草青枯病的毒力测定及田间防效试验

2017-05-02周开拓蒋承耿王秋萍龙友华

农业科技与装备 2017年11期

周开拓，蒋承耿，王秋萍，张承，龙友华*

（1.福泉市农村工作局，贵州福泉 550599；2.贵州省烟草公司六盘水市公司，贵州六盘水 553000；3.贵州农业职业学院，贵州清镇 551400；4.贵州大学农学院，贵州省烟草品质研究重点实验室，贵阳 550025）

烟草青枯病是由Ralstonia solanacearum引起的一种严重危害烤烟生长的土传病害，主要危害烤烟的根、茎、叶等部位，一般发病株率为10%～30%，严重的为70%～80%，许多烟田全田发病甚至绝收。目前，烟草青枯病的主要防治方法是化学防治，严重破坏农田生态系统，还易使病原菌产生抗药性。中生菌素是由中国农科院研制的一种N-糖甙类抗生素，既有普通化学药剂优势，兼具生物防治的特点，对水稻白叶枯病、白菜软腐病等细菌性病害，以及苹果轮纹病、西瓜枯萎病等真菌性病害具有较好的防治效果。作为一种新型生物农药杀菌剂，目前其用于防治烟草青枯病的报道较少。为此，以烟草青枯病为对象，探讨中生菌素室内和田间防治效果，旨在中生菌素在贵州烟区的合理使用提供技术依据。

1 材料与方法

1.1 材料与试剂

供试菌株为从贵州铜仁思南、毕节黔西、六盘水盘县、贵阳修文、黔南瓮安、黔西南贞丰等地采集的青枯病烟株上分离得到的青枯病菌（Ralsto nia soanacearum E F Smith）。

供试培养基为牛肉蛋白胨培养基（牛肉膏3 g，蛋白胨 10 g，Nacl5 g，琼脂 15～20 g，蒸馏水 1 000 mL）。

3%的中生菌素可湿性粉剂：东莞市瑞德丰生物科技有限公司；0.15%四霉素水剂：辽宁微科生物工程有限公司；72%农用链霉素可溶性粉剂：华北制药集团爱诺有限公司。

1.2 试验方法

1.2.1 病菌分离纯化及保存用清水冲洗病株基部茎杆表面，再用75%酒精消毒处理，用镊子取溃脓的组织于培养皿中培养，培养皿垫2层湿润滤纸，放湿润棉花保湿，置于恒温培养箱中培养1～2 d。用灭菌牙签挑取脓状物，于牛肉蛋白胨培养基上划线培养。待培养基菌落后，继续挑取菌落在培养基上划线培养。重复数次以上步骤，即可纯化出烟草青枯病菌种。对纯化的菌株编号并斜面培养长出菌落，密封保存于4℃冰箱中。

1.2.2 菌悬液制备用灭菌接种环蘸取含有烟草青枯病菌的试液，在NA培养基上划线，于28℃恒温箱中培养。待烟草青枯病菌在NA培养基上活化后，用3 mL无菌水配制病原菌原液。取1 mL病原菌原液，用无菌水按10，100，1 000等倍稀释涂板，于28℃培养48 h，根据平板上长出的菌落数推算菌原液浓度。根据菌原液浓度制备菌悬液，使1 mL菌悬液涂板后长出的菌落数为100个左右。

1.2.3 致病菌室内毒力测定采用平板菌落计数法测定中生菌素对各地烟草青枯病菌株的室内毒力。根据预测试验结果将中生菌素配置成5个浓度梯度（125，250，500，1 000，2 000 mg/L），与 45 ℃灭菌培养基按1∶9的比例混合，倒入培养皿中混匀。用移液枪吸取500 μl菌悬液喷于含药培养基上，慢慢摇匀。每处理5次重复，以无菌水为对照，在28℃恒温培养48 h后，肉眼观察统计菌落数。所得结果用农药室内生物测定数据处理系统软件计算，求出各药剂的毒力回归方程和EC50。

1.3 田间药效试验

1.3.1 试验设计试验采取随机区组设计，设3%中生菌素可湿性粉剂 1 000 倍液（A）、1 200 倍液（B）、1 400 倍液（C）、0.15%四霉素水剂 500 倍液（D）、72%农用链霉素可溶性粉剂1 500倍液（E）和清水对照（CK）共 6个处理。

每个处理4次重复，共24个小区，每小区面积33 m2（长 10.0 m，宽 3.3 m），种植 60 株（行距 1.1 m，株距 0.5 m），四周设保护行。

试验选在贵州思南县许家坝镇和德江县煎茶镇进行。试验地前茬作物为烟草，黄壤土，pH值6.5，土壤肥力中等，青枯病发生较重。2014年4月15日移栽，田间栽培管理按照当地优质烟叶生产技术规程进行。移栽时用药液浇定根水，每株浇250 mL，第2次施药时间为移栽后20 d，用900 kg/hm2药液喷淋茎基部；移栽后60 d，用药液喷淋植株及茎基部，用量为 1 350 kg /hm2。

1.3.2 药效调查第3次施药后每5 d调查1次，共调查5次。调查小区病害始发期、发病株数、病害级别，计算病情指数、发病率及防效。

病害分级标准见表1。

表1 青枯病分级标准Table 1 Grading standard of bacterial wilt

1.4 数据统计分析

采用Excel 2003和DPS数据统计软件进行统计分析。

2 结果与分析

2.1 中生菌素对烟草青枯病菌室内毒力测定

中生菌素对贵州各地烟草青枯病菌的毒力作用见表2。

表2 中生菌素对贵州各地烟草青枯病菌毒力作用Table 2 The effects of Zhongshengmycin on the virulence of tobacco bacterial wilt in various parts of guizhou

由表2可知：3%中生菌素对各地烟草青枯病均有抑制作用，不同地区的菌株对中生菌素的敏感性有一定差异；对黔南瓮安烟草青枯病抑制作用较好，EC50达 337.547 3 mg/L；对铜仁思南、贵阳修文等地的毒力次之，EC50达 361.510 3 mg/L 和 372.912 2 mg/L；对黔西和六盘水地区烟草青枯病菌的毒力较差，EC50达 428.195 7 mg/L 和 481.699 2 mg/L。

2.2 中生菌素防治烟草青枯病田间药效

中生菌素对烟草青枯病田间防治效果见表3。

从表3可知：不同药剂对烟草青枯病均有防治效果，显著降低发病率和病情指数；3%的中生菌素可湿性粉剂1 000倍液的大田防治效果好于其他药剂，平均防治效果在70.00%以上，差异均达极显著水平（P＜0.01）；其次为3%的中生菌素可湿性粉剂1 200倍，平均防治效果达63.00%以上，与其他防治药剂差异极显著（P＜0.01）；0.15%四霉素水剂 500 倍液和 72%农用链霉素可溶性粉剂1 500倍液效果较差，防治效果均小于60%，且这两种药剂之间存在差异性。