刘 静

（合肥市食品药品检验中心，安徽 巢湖 238000）

在4种溶出介质中多巴丝肼片的溶出曲线评价

刘 静

（合肥市食品药品检验中心，安徽 巢湖 238000）

目的建立多巴丝肼片中左旋多巴溶出度的检测方法及溶出曲线评价。方法采用依利特C8色谱柱(250 mm×4.6 mm，5μm)，以0.05 mol/L磷酸二氢钾溶液-甲醇-乙腈（70.5:25:4.5）（含0.005 mol/L癸烷基磺酸钠，用磷酸调节pH值至3.5）为流动相，流速1 mL/min，检测波长为270 nm[1]；溶出度试验采用桨法，分别采用pH1.2盐酸溶液、pH4.5醋酸盐缓冲液、pH6.8磷酸盐缓冲液、水分别为溶出介质，溶出介质体积1000 mL，转速50 r/min。结果在本文建立的色谱条件下，供试品在浓度4.092 μg/mL～20.460 μg/mL范围内线性关系良好，线形回归方程为Y=0.0774X-0.0083，r=0.99969（n＝5）。溶出方法适宜，能够较好地反映多巴丝肼片中左旋多巴在不同溶出介质中溶出行为的异同。结论建立的色谱条件比较简单，对多巴丝肼中左旋多巴溶出量的考察更具有专属性和准确性。

高效液相色谱法；多巴丝肼片；左旋多巴；溶出曲线

多巴丝肼片为左旋多巴（Levodopa）与苄丝肼（Benserazide）的复方制剂，作用于神经系统药物，主要用于治疗帕金森病（Parkinson）（原发性震颤麻痹paralysis agitans，shaking palsy），对脑炎后、动脉硬化性或中毒性帕金森综合征也有疗效。左旋多巴起主要的治疗作用，左旋多巴和苄丝肼的组合使用可以补偿大脑中多巴胺的不足。但左旋多巴不良反应较多，因此多巴丝肼片中左旋多巴溶出曲线的研究是为了方便以后在临床上更好的应用多巴丝肼片。

多巴丝肼片的现行质量标准是《中国药典》（2015版）二部，质量标准中含量测定项目为高效液相色谱法，却没有设定溶出度检测项目。本文试验方法是用HPLC法来评价和研究多巴丝肼片中左旋多巴在上述四种溶出介质中的溶出曲线。

1 材 料

1.1 仪器

X P 2 0 5电子天平（M E T T L E R TO L E D O），SEVENMULTI多功能测量仪（METTLER TOLEDO），U-3000高效液相色谱仪（USA Thermo Fisher公司），RCZ-8M智能溶出试验仪（含ADFC8MC溶出取样收集系统，天大天发公司）。

1.2 试药

市售样品；左旋多巴对照品（批号：100170-200303，中国药品生物制品检定研究院）；乙腈Acetonitrile（Hplc USA TEDIA）；甲醇Methanol（Hplc USA TEDIA）；水：自制超纯水；磷酸二氢钾、醋酸钠、氢氧化钠（AR国药集团）；冰醋酸、盐酸（GR国药集团）；癸烷基磺酸钠为色谱纯。

1.3 色谱条件

流动相为0.05 mol/L磷酸二氢钾溶液-甲醇-乙腈（70.5:25:4.5）（含0.005 mol/L癸烷基磺酸钠），用磷酸调节pH值至3.5；依利特C8色谱柱（250 mm×4.6 mm，5 μm）；柱温30摄氏度；检测波长270 nm；进样量10 μL；流速1.0 mL/min。

1.4 制备对照品溶液

精密称取左旋多巴对照品适量置容量瓶中，制成对照品溶液（204.6 μg·mL-1）。

2 考察溶出曲线

2.1 溶出介质

分别以水、pH1.2盐酸溶液（取盐酸7.65 mL，加水稀释至1000 mL，摇匀即得）、pH4.5醋酸盐缓冲液（取2 mol/L醋酸溶液14.0 mL，与醋酸钠2.99 g，加水溶解并稀释至1000 mL，摇匀即得）、pH6.8磷酸盐缓冲液（取0.2 mol/L磷酸二氢钾溶液250 mL，与0.2 mol/L氢氧化钠溶液112 mL混匀后，再加水稀释至1000 mL，摇匀即得）为溶出介质，体积为1000 mL。

2.2 溶出曲线测定方法

2.2.1 采用《中国药典》（2015年版）四部通则中溶出度与释放度测定法中的第二法（桨法）仪器装置，转速50 r/ min，介质温度（37±0.5）℃[2]，分别在5 min、10 min、15 min、20 min、30 min和60 min这六个时间点取5 mL，滤过，续滤液作为供试品溶液，并同时补充相同温度相同体积的溶出介质。

2.2.2 线性关系：在同等色谱条件下，将对照品溶液分别制成4.092μg/mL、8.184μg/mL、10.230μg/mL、16.368μg/ mL及20.460μg/mL这六种浓度的溶液，用流动相定容至刻度，摇匀，滤过。取此六种浓度的溶液10μL分别注入高效液相色谱仪，用对照品浓度和所测得的峰面积分别为横、纵坐标，绘制如图1所制的标准曲线。并且求得Y=0.0774X-0.0083，相关系数r=0.99969的线形回归方程，线性关系良好。

2.2.3 精密度：同等色谱条件下，取浓度为10.230μg/mL的对照品溶液连续进样6针，算出峰面积的RSD为0.8%（n=6）。

图1 多巴丝肼含量测定的标准曲线

3 结 果

多巴丝肼片在四种溶出介质中的溶出情况见图2～5。

图2 在盐酸溶液（pH1.2）中溶出曲线

图4 在水中溶出曲线

图5 在磷酸盐缓冲液（pH6.8）中溶出曲线

结果分析：多巴丝肼片在国内只有一家企业生产，样品均来自同一厂家。从上图可以看出，多巴丝肼片在pH1.2的盐酸溶液中能够迅速溶出而且溶出量能够较快的达到85%以上；在pH4.5的醋酸盐缓冲液和在水中溶出量在60 min之后才能达到85%；在pH6.8磷酸盐缓冲液中则未能溶出。普通速释制剂连续两点溶出率均达85%以上且差值在5%以内，试验则可提前结束[2-3]。在本次试验中使用的四种溶出介质中，多巴丝肼片的溶出结果未见相关报道，因此可以将最大取样时间设定为30 min。

此次试验结束后，又取了11批多巴丝肼片以pH1.2盐酸溶液为溶出介质进行溶出度试验，各批多巴丝肼片在30 min内溶出量均大于85%，因此对多巴丝肼片中左旋多巴溶出度的考察可以选择盐酸溶液（pH1.2）作为溶出介质。

本方法学研究结果显示，测定多巴丝肼片中左旋多巴的溶出度采用高效液相色谱法，具有良好的准确度和精密度，浓度与峰面积线性关系在测定浓度范围内也非常良好。故本方法可以为提高多巴丝肼片的质量标准提供部分依据。

4 讨 论

4.1 色谱条件的选择

根据《中国药典》（2015版）二部，流动相为0.05 mol/L磷酸二氢钾溶液-甲醇-乙腈（70.5:25:4.5）（含0.005 mol/L癸烷基磺酸钠）为流动相，用磷酸调节pH值至3.5；检测波长为270 nm，在该色谱试验条件下，左旋多巴和苄丝肼的分离度和理论板数均符合药典规定的要求。

4.2 测定条件的选择

目前条件下，各国药典收载的最经典的溶出方法为篮法和桨法，而在考察片剂的溶出度试验中，大都选用的是桨法，因此本文采用桨法。

制剂的溶出效率受转速的影响较大，在本次溶出曲线试验前期准备工作中，分别考察了不同转速对本品溶出的影响，得出50 r/min时对于考察多巴丝肼片的溶出度更具与方法学意义的结论，因此本文选定转速为50 r/min。

结合《中国药典》（2015版）二部中多巴丝肼片含量测定的试验方法，溶出介质的体积为1000 mL时溶出液的浓度与相应的对照品浓度比较较为适宜，因此实验溶出介质选定为1000 mL。

评价口服固体制剂内在质量的一种重要手段即为在多种pH条件下考察片剂的溶出曲线，同时考察溶出曲线也是评价药品质量一致性的重要手段之一。多巴丝肼片的原研产品没有在国内销售，且多巴丝肼片在国内也只有一家企业罗氏制药生产，因此对国内销售的多巴丝肼片产品的溶出行为的考察就显得尤为重要。本文也为国产仿制多巴丝肼片的质量一致性评价工作的进一步开展提供了相应的实验依据。

[1] 《中国药典》(2015年版)二部[S].2015:971-972.

[2] 谢沐风.溶出曲线相似性的评价方法.中国医药工业杂志,2009,40(4):308.

[3] 国家药典委员会.国家药品标准工作手册(第四版)[M].2013.94.

本文编辑：李新刚

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ISSN.2095-8242.2017.02.343.02