付涛，苏丹华，刘原，刘卿，吴亮，陈盛霞，姜旭淦

(江苏大学医学院，江苏镇江 212013)

人降钙素原的原核表达、纯化和鉴定

付涛，苏丹华，刘原，刘卿，吴亮，陈盛霞，姜旭淦

(江苏大学医学院，江苏镇江 212013)

目的 构建人降钙素原(procalcitonin，PCT)原核表达载体，获得高纯度PCT重组蛋白。方法 根据NCBI上PCT基因序列设计引物，利用PCR技术扩增PCT基因，构建PCT/pET-22b(+)重组表达载体，转化至大肠埃希菌(E.coli)BL21中诱导表达；采用镍柱亲和层析法纯化重组蛋白，用western blot和胶体金法对其进行鉴定。结果 琼脂糖凝胶电泳结果显示PCR扩增产物约为350 bp。同源性比对分析结果表明，PCT基因片段(348 bp)成功插入pTG19-T载体，未出现碱基突变。用BamHⅠ和HindⅢ对重组表达载体双酶切，得到约为350 bp和5 500 bp片段。SDS-PAGE电泳显示PCT重组蛋白以可溶性形式存在，Mr约14 000，经镍柱亲和层析法纯化后即可获得。western blot和PCT胶体金法结果呈阳性，显示融合蛋白含组氨酸标签(His-tag)，成功表达出PCT重组蛋白。结论 应用重组DNA技术成功构建PCT基因融合重组表达载体，通过蛋白质表达纯化技术获得PCT融合蛋白。

降钙素原；原核表达；纯化

降钙素原(procalcitonin，PCT)是人11号染色体中降钙素原基因表达的产物，由甲状腺滤泡旁C细胞分泌产生，含有116个氨基酸，相对分子质量(Mr)约为1 3000[1-2]。目前关于PCT的研究主要集中于PCT基因结构、功能以及导致其升高的机制和临床表现等，关于PCT检测方法的研究较少[3]。研制PCT试剂盒所需要的高纯度抗原和特异性抗体多数来自于国外公司，价格昂贵，并且因原料来源和质量不一致导致不同厂家产品检测结果相差较大，不利于检测结果的临床应用和质量控制。……