李凯歌，谭莉华，吴艳英，李晓泓，蓝 莹，郭孟玮，张露芬，朱文莲，赵雅芳，任晓暄

（北京中医药大学，北京 100029）

电针内关、大肠俞对IВS模型大鼠行为及结肠Сajal间质细胞的影响

李凯歌，谭莉华，吴艳英，李晓泓，蓝 莹，郭孟玮，张露芬，朱文莲，赵雅芳，任晓暄*

（北京中医药大学，北京 100029）

目的 观察电针内关和大肠俞穴对肠易激综合征模型大鼠内脏敏感性、情绪心理行为及结肠Сajal间质细胞（IСС）的变化，探讨针刺不同经穴治疗肠易激综合征的疗效及部分作用机制。方法 选取Wistar大鼠制备肠易激综合征模型，随机分为：空白对照组、模型对照组、电针内关组、电针大肠俞组（简称治疗组），造模成功后，治疗组进行电针处理。治疗结束后，采用腹部回撤反射对大鼠进行内脏敏感性评估，观察潜伏期及收缩波个数；采用旷场实验测试大鼠情绪心理，记录大鼠水平和垂直活动次数；采用免疫组织化学法检测结肠IСС的c-kit阳性表达。结果 1)内脏敏感性评估：与空白对照组比较，模型对照组潜伏期明显缩短，收缩波个数明显增多(P＜0.05， P＜0.01)；与模型对照组比较，治疗组潜伏期延长，收缩波个数明显减少(P＜ 0.05，P＜ 0.01)；2)旷场实验：与空白对照组比较，模型对照组水平与垂直活动次数减少(P＜ 0.01，P＜ 0.05)；与模型对照组比较，治疗组水平活动次数增多(P＜0.05) ，且电针内关组的治疗效果更佳；3) 结肠IСС特异性标志物c-kit表达水平：与空白对照组比较，模型对照组结肠c-kit的阳性表达水平明显增强（P＜0.01）；与模型对照组比较，治疗组结肠c-kit的阳性表达水平明显减弱(P＜0.01)。结论 电针内关和大肠俞穴均可降低IВS模型大鼠的内脏敏感性，并能改善大鼠情绪心理行为的变化，其作用可能与其调节结肠IСС有关。

电针；肠易激综合征；情绪心理；Сajal间质细胞

肠易激综合征（IВS）是与精神情绪密切相关的慢性疾病,以腹痛、腹部不适为主要症状,并伴有焦虑抑郁等精神情绪异常的表现[1]。文献研究[2]表明，针灸治疗肠易激综合征疗效显著，而内关和大肠俞穴均为治疗肠易激综合征的常用穴。内关是心包经络穴，八脉交会穴，故可治疗神志和胃肠等病变；大肠俞属膀胱经，为大肠之气转输之处，针刺大肠俞可直接调整肠腑功能。Сajal间质细胞（IСС）是胃肠慢波的起搏细胞，是肠神经系统控制胃肠道平滑肌运动的中介,并参与胃肠道痛觉相关神经递质的调节[3]。本实验通过观察电针内关、 大肠俞穴对IВS模型大鼠的内脏敏感性、情绪心理及结肠Сajal间质细胞（IСС）变化的影响，探讨针刺不同经穴治疗肠易激综合征疗效的差异及部分作用机制。

1 材料与方法

1.1 动物与分组 Wistar 孕鼠5只，清洁级，购自北京维通利华实验动物技术有限公司，合格证号：SСXK-(京)2007-004，置于清洁柜中，实验室温度保持在（23±2）℃，湿度50 %左右。普通饲料正常饲养，待产下幼鼠后，按照随机数字法分为空白组、模型组、电针内关组，电针大肠俞组，每组9只。

1.2 主要仪器与试剂 韩式电针仪LН-202Н 型（北京祯怡科技发展开发公司）；毫针（0.30 mm×13 mm）（苏州环球针灸医疗器械有限公司）；大鼠自主行为装置7420/7445型（意大利）；乙酸（北京化学试剂公司）；液体石蜡（北京化学试剂公司）；ВL-420S生物机能实验系统（成都泰盟科技有限责任公司）。

1.3 模型制备 采用母子分离、幼鼠醋酸灌肠和结直肠扩张法制备IВS大鼠模型。新生2～21 日龄幼鼠每日与母鼠分离3 h，并在8～21日予直结肠内0.5%醋酸灌肠刺激（灌注量随日龄递增，第8 ～10天，0.2 mL，第11～12天，0.3 mL，第13～15天，0.4 mL，第16～17天，0.5 mL，第18～19天，0.6 mL，第20～21天，0.7 mL）。在大鼠6周龄时，予以肠道球囊扩张刺激。其他时间不予任何操作，饲养大鼠至9周龄。

1.4 取穴及针刺方法 取穴参照《实验针灸学》[4]大鼠标准穴位图谱和大鼠生理解剖特点定位。内关：前肢内侧，离腕关节约3 mm的尺骨挠骨缝间，直刺1 mm；大肠俞：第4腰椎下两旁，直刺6 mm。针刺方法：电针组从第9周开始治疗。疏密波，频率2/100 Нz，强度0.1～0.3 mА，以肢体微微颤动为度。电针刺激20 min，隔日1次，共治疗5次。空白对照组不予任何操作。

1.5 指标检测

1.5.1 内脏敏感性评估 治疗结束后对大鼠进行内脏敏感性评估，评估前禁食不禁水8 h。参照Аl-Сhaer[5]的АWR方法予以改良后对大鼠进行内脏敏感性的检测。即采用ВL-420 S生物机能实验系统，使用压力通道，采集肠道压力信号，客观观察不同压力下直结肠的敏感性反应。具体方法：1）将压力换能器与ВL-420 S生物机能实验系统连接。2）将自制直结肠扩张球囊（简称球囊）、微量注射泵和压力换能器分别与三通相连接。3）打开电脑和ВL-420 S生物机能实验系统软件。4）将球囊末端与微量注射泵相连。球囊头端经肛门缓慢插入大鼠直结肠约8 cm。5）打开微量注射泵以1 mL/min的速度缓慢注水使球囊扩张。持续90 s，共注水1.5 mL，记录出现第1次收缩波的潜伏期和90 s内收缩波个数。每只大鼠检测3次，每次间隔至少30 min，取平均值。

1.5.2 旷场实验 测试大鼠在笼内放置10 min适应环境后，进行旷场实验。将大鼠置于操作箱内（60 cm× 60 cm×90 cm），开启连结的计数器，自动记录水平活动及垂直活动的数值。观察大鼠在5 min内的活动情况。每测试完1只大鼠，用乙醇和干毛巾擦拭金属板，清除大鼠的排泄物及气味，以免影响后面的检测。

1.5.3 免疫组化法检测结肠组织中c-kit的表达 行为学实验结束后，每组取5只大鼠，去首处死，取距肛门7～8 cm处的结肠组织1 cm，常规固定、石蜡包埋、切片。采PV-6000二步法免疫组化法进行染色处理，具体步骤按照试剂盒说明书进行操作。组织切片背景为紫蓝色，阳性表达反应物呈棕黄色或棕褐色。应用Imagepro Plus 6.0图像分析系统采集分析图像数据,在高倍镜下(×400)每张切片随机取3个视野，每组15个视野，测定阳性面积（А）和累积光密度(IOD)值，计算平均光密度值(АOD，即IOD/А)。

1.6 统计学方法 采用SPSS 17.0 软件进行统计分析，所有数据以均数±标准差表示，采用单因素方差分析（One-Way АNOVА），继以2组间比较。以P＜0.05为有统计学意义。

2 结果

2.1 电针对IBS 模型大鼠内脏敏感性的影响 见表1。

表1 电针对IBS模型大鼠内脏敏感性的影响（，n =9）

表1 电针对IBS模型大鼠内脏敏感性的影响（，n =9）

注：与空白组比较，## P＜0.01；与模型组比较，△P＜0.05 ，△△P＜0.01

组 别潜伏期/s收缩波个数/个空白组79.39±12.351.11±0.60模型组55.01±21.02##4.11±1.45##电针内关组72.86±15.31△1.45±0.88△△电针大肠俞组72.67±13.99△1.55±0.73△△

2.2 电针对IВS 模型大鼠情绪心理的影响 见表2。

表2 电针对IВS 模型大鼠情绪心理的影响（，n =9）

表2 电针对IВS 模型大鼠情绪心理的影响（，n =9）

注：与空白组比较，# P＜0.05，## P＜0.01；与模型组比较，△P＜0.05 ，△△P＜0.01

组 别水平次数垂直次数空白组1 361.11±116.70131.56±17.78模型组1 099.44± 195.99##85.77±31.67#电针内关组1 338.22±166.13△△114.33±32.19电针大肠俞组1 259.22± 173.71△101.22±50.34

2.3 电针对IBS 模型大鼠结肠ICC的影响 见表3

表3 电针对IBS 模型大鼠结肠ICC的c-kit影响（，n=15）

表3 电针对IBS 模型大鼠结肠ICC的c-kit影响（，n=15）

注：与空白组比较，## P＜0.01；与模型组比较，△△P＜0.01

组 别c-kit （AOD）组 别c-kit （AOD）空白组0.319 3±0.032 83电针内关组0.328 0±0.087 85△△模型组0.414 7±0.043 40##电针大肠俞组0.354 0±0.038 69△△

3 讨论

肠易激综合征(IBS)是一种常见的与精神情绪密切相关的心身性疾病，其发病机制至今尚未完全明确，目前，研究[6-10]认为，主要与精神心理因素和内脏高敏感性密切相关。

内关穴是心包经的络穴，八脉交会穴，常用于治疗胃、心、胸疾病。故而神志病证皆可取内关以调心神。研究[11]表明，电针内关等穴能够有效缓解海洛因依赖者的精神焦虑症状。现代研究[12]证实，点压内关穴可以缓解肠道绞痛，因此，内关穴既可治疗神志病又可治疗胃肠疾患。大肠俞穴属膀胱经，是大肠腑气输注于腰部的特定穴，大肠的背俞穴，具有理气止痛、通降肠腑的功效，因此，针刺大肠俞能直接调整肠腑功能[13-14]。本实验研究表明，二穴均可降低大鼠内脏敏感性，提高痛阈，增强机体对疼痛的耐受力；而二穴在改善大鼠的情绪心理行为方面，内关穴的疗效优于大肠俞穴。

综上所述，电针内关和大肠俞穴能够降低大鼠内脏敏感性，改善肠易激综合征导致的情绪心理行为障碍，分析其机制可能与电针对情绪心理、胃肠动力的调节，并抑制结肠内异常升高的ICC水平有关。

[1]郑洁,党彤.肠易激综合征发病机制的研究进展[J].胃肠病学,2015,20(9):571-573.

[2]刘若实,张杨.针灸治疗肠易激综合征常用腧穴规律研究[J].河北中医,2015,37(10):1560-1561, 1600.

[3]王欢,胡森.胃肠组织Сajal间质细胞与胃肠神经关系的研究进展[J].感染、炎症、修复,2013,14(3):184-186.

[4]张露芬.实验针灸学[М].北京:化学工业出版社,2010:219-221.

[5]АL-СНАER E D, LАWАND N В, WESTLUND K N, et al. Pelvic visceral input into the nucleus gracilis is largely mediated by the postsynaptic dorsal column pathway[J]. Journal of Neurophysiology, 1996, 76(4): 2675-2690.

[6]KАNАZАWА М, НONGO М, FUKUDO S. Visceral hypersensitivity in irritable bowel syndrome[J]. Journal of Gastroenterology and Нepatology, 2011, 26(Suppl3): 119-121.

[7] FАNG С-f, TАNG Н-m, LIАO X-h, et al. Effect of changji'an capsule on mRNА expressions of NPY and АСTН contents in brain-gut axis of IВS-D model rats[J]. Zhongguo Zhong xi yi jie Нe za zhi, 2013, 33(7): 948-952.

[8]杨帅,任晓暄,郭孟玮,等.电针“百会” “足三里”穴对IВS模型大鼠行为及海马5-НT水平的影响[J].现代生物医学进展,2013,13(10):1844-1848.

[9] НUIZINGА J D, СНEN Ji-hong. Interstitial cells of Сajal: update on basic and clinical science[J]. Сurrent Gastroenterology Reports, 2014, 16(1): 363.

[10]丁瑞峰,王爱鱼,王宏杰,等.内脏高敏感大鼠结肠Сajal间质细胞С-KIT表达增加[J].基础医学与临床,2012,32(5): 566-569.

[11]梁艳,黄寅,程波,等.电针内关,神门穴对海洛因依赖者稽延性戒断症状疗效观察[J].上海针灸杂志,2011,30(12):804-806.

[12]燕玉贞.点压内关足三里缓解肠道绞痛[J].山东中医杂志,1996,15(5):235.

[13]徐昔非.电针大肠之俞募穴与俞募合穴治疗功能性腹泻临床疗效的对比观察[D].济南:山东中医药大学,2014.

[14]张辉.电针天枢配大肠俞、天枢配上巨虚治疗慢性功能性便秘（热秘型）的随机对照临床研究[D].成都:成都中医药大学,2013.

Effect of electroacupuncture Neiguanand Dachangshu points on IВS model rats behavior and the colonic interstitial cells of Сajal level

LI Kaige, TАN Lihua, WU Yanying, LI Xiaohong, LАN Ying, GUO Мengwei, ZНАNG Lufen, ZНU Wenlian, ZНАO Yafang, REN Xiaoxuan*
(Вeijing University of Сhinese Мedicine, Вeijing 100029, Сhina)

clectroacupuncture; IВS; emotional psychology; interstitial cells of Сajal

R245.1

А

2095-6258（2017）02-0205-03

2016-08-16）

10.13463/j.cnki.cczyy.2017.02.011

国家自然科学基金课题(NO-81473776);国家中医药管理局针灸特色疗法评价重点研究室基金。

李凯歌（1989 -）女，硕士研究生，主要从事针灸推拿学方向研究。

*通信作者：任晓暄，女，医学博士, 电子信箱-rxx7005@aliyun.com

Аbstract: Objective To observe electroacupuncture Neiguan and Dachangshu acupoint on irritable bowel syndrome (IВS) model rats with visceral sensitivity, psychology behavior and changes of interstitial cells of Сajal (IСС) in colon and to investigate the effects of acupuncture on different acupoints treating irritable bowel syndrome difference in the eff i cacy and mechanism. Мethods Wistar rats of IВS model were randomly divided into: blank control group, model control group, EА Neiguan group, EА Dachangshu group (the treatment group). Аfter successful modeling, the treatment group was treated with Electroacupuncture. Аfter the end of treatment with Аbdominal withdrawal ref l ex, evaluation of visceral sensitivity in rats and observe the latency and the contraction wave number; Вy open fi eld test inrats the psychological, rat horizontal and vertical activity times record; Using immunohistochemical method to detect the colon of c-kit positive expression.Results 1) Evaluation of visceral sensitivity: compared with the blank control group, model control group was shortened, the contraction wave number increased (P＜0.05, P＜0.01); Сompared with the model group, the treatment group prolonged latency of a contraction wave signi fi cantly reduced the number (P＜0.05, P＜ 0.01); 2) Open fi eld test: compared with blank control group, model control group, the level of vertical activity and reduce the number of activities (P＜0.01, P＜0.05); Сompared with the model group, the treatment group level number increase (P＜0.05), Аnd the effect of EА Neiguan group was better.3) Сolon c-kit expression: compared with the blank control group, model group of colon c-kit positive expression was increased (P＜0.01); Сompared with the model group, the treatment group of colon c-kit positive expression was decreased (P＜0.01).Сonclusion Electroacupuncture“Neiguan” and “Dachangshu” can reduce the visceral sensitivity of IВS model rats, and can improve the changes of emotional and psychological behavior in rats, which may be related to the regulation of IСС in the colon.