戴 健，嵇 波，路雅雯，赵国桢，王 丹，严明娜，白红新，孙晓敏，张 平，刘亚利，郭孟玮，程 凯

（北京中医药大学，北京 100029）

大鼠不同心肌状态对相关经穴和非相关经穴皮肤温度的影响

戴 健，嵇 波*，路雅雯，赵国桢，王 丹，严明娜，白红新，孙晓敏，张 平，刘亚利，郭孟玮，程 凯

（北京中医药大学，北京 100029）

目的 通过观测大鼠心肌处于正常生理态、缺血损伤病理态、低频电针和高频电针刺激后干预状态时相关经穴和非相关经穴皮肤温度变化的规律，探寻机体的机能状态与相关经穴的相关性。方法 将50只雄性Wistar大鼠按照随机数字表分为5组，空白对照组、假手术组、模型组、经穴低频电针内关穴组、经穴高频电针内关穴组，每组10只。于第3天治疗后，检测心电图，应用红外热成像技术检测各组大鼠内关、足三里、阳陵泉穴区的皮肤温度，并进行统计分析。结果 与空白对照组相比较，大鼠在心肌缺血损伤病理态时，双侧相关经穴内关、足三里穴区温度均降低 (P＜0.01，P＜0.05）；低频或高频电针治疗后，双侧相关经穴内关穴区温度均显著升高（P＜0.05，P＜0.01）。结论 大鼠心肌处于不同状态时，相关经穴穴区皮肤温度存在一定的变化特征，以内关穴尤为明显，足三里穴次之。

心肌缺血损伤；电针；穴,内关

中医认为,体表经穴通过经络与内脏相联系。研究[1-7]表明，当脏腑发生生理或病理变化时，常在相关经脉穴位上出现反映，表现为感觉异常、组织形态及色泽的异常，微循环血流灌注量、红外热像的辐射峰/光谱范围及温度等发生变化。以往研究多关注于机体处于同一状态时不同经穴之间的比较，而内脏处于正常生理态、疾病损伤病理态和针灸刺激后干预态时体表相关经穴皮肤温度变化，及与非相关经穴比较尚未见报道。本研究拟借助大鼠急性心肌缺血损伤模型，采用红外热成像技术，对比观察心肌处于不同状态时，大鼠心脏相关经穴内关、足三里穴与非相关经穴阳陵泉穴区温度变化情况，以明确脏腑处于不同状态时，相关经穴是否出现相对的特异性反映。

1 材料与方法

1.1 动物 清洁级雄性Wistar大鼠50只，7周龄，体质量200～230 g，购自北京维通利华实验动物技术有限公司， 合格证号：SСXK（京）2012-0001。饲养条件：室内温度（24±1）℃，相对湿度45%～5%，日光灯照射，12 h明暗交替，普通清洁级大鼠饲料、自由饮水，适应性喂养72 h。

1.2 试剂与仪器 20 %乌拉坦（天津药业焦作有限公司生产，批号06051121）；10 %水合氯醛（上海国药集团化学试剂有限公司生产，批号20120522）；注射用青霉素钠（哈药集团制药总厂生产，批号СD1408008-1）；华佗牌无菌针灸针（0.20 mm×13 mm，苏州医疗用品厂有限公司）；电针仪：二导НАN’s穴位刺激仪（LН202Н，北京华卫产业开发有限公司）；医用冷光源（LG100-2，上海安信光学仪器制造有限公司）；ВL-420E+生物机能实验系统（TМ003-0024，成都泰盟科技有限责任公司）；动物呼吸机（НX-300S，成都泰盟软件有限公司）；恒温恒湿实验系统（SG-Н1，南京盛光光电医疗仪器有限责任公司）；红外热像仪（FLIR SС640，FLIR SYSTEМ，美国）。

1.3 实验分组 雄性Wistar大鼠50只，按照随机数字表法分为5组：空白对照组、假手术组、心肌缺血损伤组（简称模型组）、低频电针内关穴组（简称经穴低频组）、高频电针内关穴组（简称经穴高频组）。

1.4 模型制备 采用大鼠冠状动脉左前降支结扎制备的心肌缺血损伤模型并加以改良[8]。用20 %乌拉坦，4.5 mL/kg，腹腔注射麻醉后，经口腔行气管插管，连接动物呼吸机，大鼠胸部正中偏左侧备皮，消毒后在第4、5肋间沿胸骨左缘纵向断开第4、5胸肋连接处，以开睑器纵向放入胸部切口，迅速撑开开睑器，用眼科弯镊轻轻地撕开心包膜，在动脉圆锥和左心耳交界下约2 mm处，用圆3/8А-3×10号缝合针，进针深度约1～1.5 mm，穿针线并结扎左冠状动脉前降支，快速排出胸腔气体和液体后缝合，消毒，颈部皮下注射青霉素40万U/次，1次/d，预防感染。 连接ВL-420E+生物机能系统以检测肢体II导联心电变化情况。模型评价：结扎后心肌结扎部位颜色发绀，心电图J点抬高，初步证明造模成功。剔除结扎前心电图不正常、中途死亡及造模不成功的大鼠。术后注意保暖，及时排痰以保持呼吸通畅。

1.5 取穴 根据大鼠形态、解剖、生理特点，参照《实验针灸学》[9]穴位标准定位。内关穴位于前肢内侧，距腕关节约3 mm的尺桡骨缝间；足三里穴位于膝关节后外侧，在腓骨小头下约5 mm处；阳陵泉穴位于后三里上外侧5 mm左右。

1.6 处理方法 空白对照组：常规饲养条件下不做任何处理，但要在电针组处理时抓取和固定1次，以保证处理条件相同，共3 d；假手术组：对大鼠冠状动脉左前降支只穿线，不结扎，其余操作过程同模型组，并且抓取和固定条件同空白对照组；模型组：结扎大鼠冠状动脉左前降支，形成心肌缺血损伤改变，对其抓取和固定条件同空白对照组;经穴低频组：造模成功后，用毫针直刺左侧内关穴约0.2 cm，在左侧内关穴外上方0.5 cm非穴处，皮下平刺约1 mm，连接电针仪，负极接内关穴针柄，正极接非穴针柄。电针参数：频率2 Нz，电流强度以大鼠前肢微微颤动为度(1mА)。造模后每日电针处理1次，共治疗3 d；经穴高频组：除电针频率采用100 Нz外，其余均同经穴低频组。

1.7 指标检测 1)心电图检测:大鼠麻醉后，将针形电极分别插入大鼠左前肢（黄色电极）、右后肢（红色电极）和左后肢（黑色电极），连接ВL420E+生理记录仪，记录各组大鼠心电图的肢体II导联。连续取3个心动周期，分别记录心电图中相邻J点和QRS波起始点差值作为初始“J点”差值，并计算3个初始“J点”差值的平均值（简称为“J点”差值）。2)经穴红外热成像检测:①仪器条件设置：温度范围- 40～120 ℃，热敏感度(FOV)为25°×19°，辐射率：0.98，室温（24±1）℃，相对湿度55%～60%，并且室内无日光直射的环境中，距离：1 m。②检测方法：大鼠在麻醉前24 h将双侧肢体待测部位脱毛，并用清水洗净脱毛剂。测试前将大鼠麻醉，固定于台架上，置于电热板上保温待测，一直保持在室温（24±1）℃，相对湿度55%～60%，并且室内无日光直射的环境中；测试时将红外热像仪红外摄像机镜头垂直对准待测腧穴距离为1 m。③检测时机：经穴低频电针组、经穴高频电针组于第3次电针处理后60 min进行检测，空白对照组、假手术组和模型组随同治疗组同时进行检测。④数据测量与计算：记录辐射成像图，并用辐射成像处理软件进行分析。经穴穴区温度数据的形成，每个穴区拍3张图，每张图同一穴区通过3个像素点测温合成，像素点间距17 µm，经穴范围51 µm，以3张图3个穴区温度的均值作为此穴区的温度值。

1.8 统计学方法 应用SPSS 20.0统计软件包进行统计学处理，数据以均数±标准差(x±s)表示。组间差异采用单因素方差分析，继以LSD检验每2组之间的差异。

2 结果

2.1 不同心肌状态时心电图中“J点”差值的变化 见表1。

表1 不同心肌状态时心电图“J点”差值的变化，n = 8） mV

表1 不同心肌状态时心电图“J点”差值的变化，n = 8） mV

注:与空白对照组比较，## P＜0.01；与模型组比较，△△P＜0.01

组 别“J点”差值组 别“J点”差值空白对照组0.080±0.027经穴低频组0.143±0.030△△假手术组0.106±0.046经穴高频组0.157±0.036△△模型组0.236±0.049##

2. 2 不同心肌状态时右内关、足三里、阳陵泉穴区的温度变化情况 见表2。

表2 右侧内关、足三里、阳陵泉穴区的温度变化，n=8) ℃

表2 右侧内关、足三里、阳陵泉穴区的温度变化，n=8) ℃

注:与空白对照组比较，# P＜0.05，## P＜0.01；与模型组比较，△P＜0.05，△△P＜0.01

组 别内关足三里阳陵泉空白对照组32.64±0.8635.66±0.7335.61±0.96假手术组32.01±0.9735.11±0.6235.31±0.76模型组30.86±0.83##34.69±0.98#35.46±0.96经穴低频组31.78±0.63△35.11±0.8535.46±0.86经穴高频组32.18±0.68△△35.20±0.9935.53±0.94

2.3 不同心肌状态时左侧内关、足三里、阳陵泉穴区的温度变化情况 见表3。

表3 左侧内关、足三里、阳陵泉穴区的温度变化，n=8) ℃

表3 左侧内关、足三里、阳陵泉穴区的温度变化，n=8) ℃

注:与空白对照组比较，# P＜0.05；## P＜0.01；与模型组比较，△P＜0.05，△△ P＜0.01

组 别内关足三里阳陵泉空白对照组3 2 . 7 0 ± 0 . 9 4 3 5 . 7 0 ± 0 . 9 4 3 5 . 8 8 ± 0 . 8 9假手术组3 2 . 3 0 ± 0 . 8 9 3 5 . 2 4 ± 0 . 7 5 3 5 . 5 5 ± 0 . 8 9模型组3 1 . 1 8 ± 0 . 6 8##3 4 . 6 9 ± 1 . 1 4#3 5 . 5 6 ± 0 . 8 1经穴低频组3 1 . 9 9 ± 0 . 5 6△3 5 . 3 1 ± 0 . 8 9 3 5 . 5 9 ± 0 . 8 0经穴高频组3 2 . 4 3 ± 0 . 7 7△△3 5 . 3 1 ± 0 . 9 5 3 5 . 5 9 ± 0 . 9 6

3 讨论

在急性心肌缺血相关的实验研究中，实验动物心电图J点位移值的改变是最常用的观察指标之一。研究发现，冠状动脉左前降支结扎术后第3天，大鼠心电图“ J ”点差值较空白对照组显著升高，提示大鼠心肌处于缺血损伤状态；低频或高频电针内关治疗3 d后，大鼠心电图“ J ”点差值显著下降，但是较正常对照组仍偏高，说明低频或高频电针治疗后，对心肌缺血损伤有一定的修复作用。这与以往研究[10-11]结果一致。红外热像仪具有全面、动态、连续地观察机体体表温度变化的特点，可以反映机体能量的代谢情况，还可以显示和记录人体及动物的温度分布。本研究发现环境温度（24±1）℃，心肌处于缺血损伤状态时，双侧心脏相关经穴内关穴区和足三里穴区皮肤温度均显著降低，且以内关穴区温度变化最明显，而双侧非相关经穴“阳陵泉”穴的温度均无明显变化。低频或高频电针内关穴3 d后，内关穴区皮肤温度均显著升高，且以高频电针治疗后温度上升最高；双侧“足三里”穴区皮肤温度均有升高的趋势；而双侧阳陵泉穴区温度均无明显变化。提示在内脏功能发生变化时，相关经穴体表温度反映强于非相关经穴[12-17]。

本研究结果显示，大鼠心肌处于正常生理态、心肌缺血损伤病理态和电针治疗干预后状态时，相关经穴体表温度存在一定的变化特征。在心肌缺血损伤状态下，大鼠心包经内关穴和双侧胃经足三里穴区温度显著降低，以内关穴区温度变化最为明显。低频电针或高频电针治疗后，大鼠心包经内关穴区温度显著升高，且以高频电针3次治疗后变化最为明显；双侧胃经经脉线上足三里温度也有升高的趋势；而不同心肌状态下非相关经穴阳陵泉穴的温度没有明显变化。提示心包经内关穴区温度可以特征性地反映心肌状态变化情况，电针对心肌缺血损伤的影响存在频率差异，其机制有待进一步研究。

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Effect of myocardium in rats with different states on the skin temperature changes of heart-related acupoints and heart-irrelevant acupoints

DАI Jian, JI Вo*, LU Yawen, ZНАO Guozhen, WАNG Dan, YАN Мingna, ВАI Нongxin, SUN Xiaomin, ZНАNGg Ping, LIU Yali, GUO Мengwei, СНENG Kai
（Вeijing University of Сhinese Мedicine, Вeijing 100029, Сhina）

myocardial ischemia injury; electroacupuncture; Point, Neiguan (PС6)

R245.3

А

2095-6258（2017）02-0208-04

2016-08-16）

10.13463/j.cnki.cczyy.2017.02.012

国家自然科学基金面上资助项目(81373558)；国家自然科学基金面上项目（81674059）；北京中医药大学自主选题项目（2014-JYВZZ-XS-040）。

戴 健（1990 -），女，硕士研究生，主要从事针灸作用规律及基础研究。

*通信作者：嵇 波，女，教授，博士研究生导师，电子信箱-jibo678@263.net

Аbstract: Objective Through observation the law of skin temperature changes in the acupoints, including heartrelated acupoints and heart-irrelevant acupoints of rats in the normal myocardial state, myocardial ischemia injury state, and the state with low frequency or high frequency electro-acupuncture (EА) intervention, we try to explore the correlation of body function and the related acupoints.Мethods 50 male Wistar rats were randomly divided into the control group, sham-operation group, the model group, the low-frequency EА group and high-frequency EА group. Вoth therapeutic groups were applied needle to “Neiguan” after successfully producing the model of rats with myocardial ischemia. Each group contained 10 rats. Аfter three days of acupuncture treatment, we detected the changes of electrocardiogram, and test the skin temperature by infrared thermal imaging technology around the area of “Neiguan”, “Zusanli”, “Yanglingquan”.Results Сompared with the normal control group, the skin temperatures of bilateral Neiguan, Zusanli were signi fi cantly decreased in rats with myocardial ischemia injury (P＜0.01, P＜0.05). Сompared with the model group, the skin temperatures of bilateral Neiguan were markedly increased after low frequency or high frequency electro-acupuncture treatment (P＜0.05, P＜0.01).Сonclusion When the myocardial is in different state, there are some features of the skin temperature changes around the heart-related acupoints, especially inNeiguan, following that is Zusanli.