张子杰，袁 征，闫振宇

肝细胞癌组织中TLR4、MyD88、NF-kB表达量及其与临床病理特征的相关性分析

张子杰，袁 征，闫振宇

（河南省南阳市中心医院 病理科，河南 南阳 473009）

目的 研究肝细胞癌组织中TLR4、MyD88、NF-κB表达量及其与临床病理特征的相关性。方法选择肝细胞癌患者并采集血清、肝细胞癌组织、癌旁组织，选择健康志愿者并采集血清，检测肝脏组织中TLR4、MyD88、NF-κB的mRNA含量及血清中AFP、TK1、GP73、ASPH的含量。结果 肝细胞癌组织中TLR4、MyD88、NF-κB的mRNA含量均高于癌旁组织；TNM III-IV期、低未分化、淋巴结转移的肝细胞癌组织中，TLR4、MyD88、NF-κB的mRNA含量均高于TNM I～II期、高中分化、无淋巴结转移的肝细胞癌组织；肝细胞癌患者血清中AFP、TK1、GP73、ASPH的含量高于健康对照组，且与肝细胞癌组织中TLR4、MyD88、NF-κB的mRNA含量呈正相关。结论 肝细胞癌组织中TLR4通路功能增强且与肝细胞癌的临床病理分期、血清肿瘤标志物含量密切相关。

肝细胞癌；Toll样受体4；信号通路；肿瘤标志物

肝细胞癌是世界范围内发病率最高的恶性肿瘤之一，流行病学资料显示，全世界每年新发肝细胞癌病例数超过60万，肝细胞癌致死亡居全球癌症死亡的第3位，居我国癌症死亡的第2位。乙型肝炎病毒以及丙型肝炎病毒感染所致肝硬化是肝细胞癌的重要病因，病毒感染会造成肝细胞增殖和凋亡失控、细胞癌变。Toll样受体4（Toll-like receptor 4，TLR4）是一类模式识别受体，能够识别多种损伤相关分子模型（DAMPs）以及病原相关分子模式（PAMPs）并造成下游多种增殖和凋亡基因表达改变，进而造成细胞恶变的发生[1-2]。本研究分析了肝细胞癌组织中TLR4通路功能及其与临床病理分期的相关性。现报道如下。

1 资料与方法

1.1 一般资料

入组对象为2012年5月-2014年12月河南省南阳市中心医院确诊为肝细胞癌的35例患者以及在本院体检的35例健康志愿者。肝细胞癌患者经病理学检查确诊，其中，男性22例，女性13例；年龄（56.49±6.48）岁。健康志愿者经体检确认体健，其中，男性24例，女性11例。

1.2 材料

收集肝细胞癌患者的血清、肝细胞癌组织、癌旁5 cm组织以及健康志愿者的血清作为研究材料，RNA抽提、逆转录以及PCR反应试剂盒购买于北京康为世纪公司，酶联免疫吸附试剂盒购买于上海西唐公司。

1.3 方法

1.3.1 血清标本及血清中指标检测 采用酶联免疫吸附试剂盒测定AFP、TK1、GP73、ASPH的含量，操作按照试剂盒说明书进行。

1.3.2 组织中指标检测 取肝细胞癌组织、癌旁组织，采用RNA抽提试剂盒提取RNA，逆转录为cDNA后进行PCR扩增，所扩增的基因包括TLR4、MyD88、NF-κB，根据扩增曲线计算mRNA含量。

1.4 统计学方法

采用SPSS 20.0统计软件进行数据处理，计量资料采用均数±标准差（x±s）表示，计量资料用t检验；相关性分析采用Pearson检验，P＜0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 肝细胞癌组织和癌旁组织中TLR4、MyD88、NF-κB的表达量

肝细胞癌组织中TLR4、MyD88、NF-κB的mRNA含量均高于癌旁组织，两组间的差异有统计学意义（P＜0.05）。见表1。

2.2 不同临床病理分期肝细胞癌组织中TLR4、MyD88、NF-κB的表达量

TNM III-IV期、低未分化、淋巴结转移的肝细胞癌组织中，TLR4、MyD88、NF-κB的mRNA含量均高于TNM I-II期、高中分化、无淋巴结转移的肝细胞癌组织。见表2。

2.3 肝细胞癌患者和健康志愿者血清中肿瘤标志物的含量

肝细胞癌患者血清中AFP、TK1、GP73、ASPH的含量高于健康对照组，两组间的差异有统计学意义（P＜0.05）。见表3。

表1 肝细胞癌组织和癌旁组织中TLR4、MyD88、NF-kB的表达量 （n=35，x±s）

表2 不同临床病理分期肝细胞癌组织中TLR4、MyD88、NF-kB的表达量 （x±s）

表3 肝细胞癌患者和健康志愿者血清中肿瘤标志物的含量比较 （n=35，x±s）

2.4 TLR4通路功能与血清肿瘤标志物含量的相关性分析

肝细胞癌组织中TLR4、MyD88、NF-κB的mRNA含量与血清中AFP、TK1、GP73、ASPH的含量呈正相关。见表4。

表4 TLR4通路功能与血清肿瘤标志物含量的相关性分析结果

3 讨论

Toll样受体（Toll-like receptors，TLRs）是一类天然免疫受体，该家族中的所有成员均为I型跨膜蛋白，能够识别多种损伤相关分子模型（DAMPs）以及病原相关分子模式（PAMPs）[3]。TLR4是TLRs家族中研究最广泛的一个成员，其细胞膜外的区域能够识别DAMPs和PAMPs，其细胞内区域能够通过髓样分化因子（MyD88）激活下游多种信号通路，进而通过NF-κB来调节靶基因的表达[4-6]。TLR4不仅表达在免疫细胞、炎性细胞中，并且在肿瘤细胞中也有表达，能够参与炎症反应、细胞增殖和凋亡等过程的调控。近年来，越来越多的研究证实，TLR4信号通路通路过度激活与胃癌、结直肠癌、卵巢癌及宫颈癌等多种恶性肿瘤的发生有关[7-8]。

肝细胞癌的发生和发展与乙型肝炎病毒、丙型肝炎病毒等病院分子的感染有关。肝炎病毒感染肝脏细胞后，能够以PAMPs的形式被TLR4识别，进而通过炎症损伤过度修复、肿瘤微环境致瘤分子表达改变等途径来造成肝细胞过度增殖、凋亡受阻。TLR4识别肝炎病毒后，能够通过MyD88来激活NF-κB抑制蛋白激酶、使NF-κB抑制蛋白家族磷酸化并发生降解，进而导致NF-κB转位进入细胞核并启动多种促增殖基因的转录过程[9]。为了明确TLR4通路在肝细胞癌变过程中所发挥的作用，本研究分析了肝细胞癌组织和癌旁正常组织中TLR4通路中相关分子的表达量，结果显示：肝细胞癌组织中TLR4、MyD88、NF-κB的表达量均高于癌旁正常组织。这就初步提示TLR4信号通路过度激活与肝细胞癌的发生有关。

在肝细胞癌变的过程中，细胞表型发生改变，表现出极强的增殖、迁移、侵袭能力。在肝细胞癌的临床病理进程中，癌细胞的增殖以及局部浸润会造成肿瘤不断发展、体积逐步增大；癌细胞向脉管系统的侵袭会造成肝细胞癌发生远处脏器以及淋巴结转移。为了明确TLR4信号通路在肝细胞癌病情进展过程中所发挥的作用，本次研究分析了不同临床病理分期肝细胞癌组织中TLR4通路中相关分子的表达量，结果显示，TNMⅢ、Ⅳ期、低未分化、淋巴结转移的肝细胞癌组织中，TLR4、MyD88、NF-κB的mRNA含量均高于TNMⅠ、Ⅱ期、高中分化、无淋巴结转移的肝细胞癌组织。这就说明TLR4信号通路过度激活与肝细胞癌的临床病理进程有关。

在临床实践中，血清肿瘤标志物是诊断肝细胞癌并判断肝细胞癌严重程度的常用客观指标。在肝细胞癌变的过程中，细胞内多种分子的表达异常升高并分泌进入血液循环。甲胎蛋白（AFP）是临床上应用最广泛的肝细胞癌标志分子，胸苷激酶（TK1）、高尔基体蛋白73（GP73）、天冬氨酰-β-羟化酶（ASPH）是新发展起来的肝细胞癌标志分子。TK1的功能是催化脱氧核苷酸转化为磷酸脱氧核苷酸、促进细胞增殖；GP73是在肝细胞恶变过程中由高尔基体释放进入胞浆和血清的糖蛋白；ASPH的功能是促进细胞生长、侵袭[10-12]。对血清中肿瘤标志分子含量及其与TLR4信号通路分子表达量的相关分析，结果显示：肝细胞癌患者血清中AFP、TK1、GP73、ASPH的含量高于健康对照组且与肝细胞癌组织中TLR4、MyD88、NF-κB的mRNA含量，并且呈正相关。

综上所述，肝细胞癌组织中TLR4通路功能增强且与肝细胞癌的临床病理分期、血清肿瘤标志物含量密切相关。

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（张西倩 编辑）

Correlations ofTLR4,MyD88andNF-κBexpressions with clinicopathological features in hepatocellular carcinoma

Zi-jie Zhang,Zheng Yuan,Zhen-yu Yan
(Department of Pathology,Central Hospital of Nanyang,Nanyang,Henan 473009,China)

Objective To investigate the correlations ofTLR4,MyD88andNF-κB expressions with clinicopathological features in hepatocellular carcinoma.Methods Patients with hepatocellular carcinoma were chosen and their serum,hepatocellular carcinoma tissues and paracancerous tissues were collected,and serum was also collected from healthy volunteers.The mRNA levels ofTLR4,MyD88andNF-κBin hepatocellular carcinoma tissues and serum content of AFP,TK1,GP73 and ASPH were detected.Results The mRNA levels ofTLR4,MyD88 andNF-κBin the hepatocellular carcinoma tissues were significantly higher than those of the paracancerous tissues. The mRNA levels ofTLR4,MyD88andNF-κBin the hepatocellular carcinoma tissues of the patients with TNM stage III-IV,poorly-differentiated or undifferentiated cancer and lymph node metastasis were significantly higher than those in the hepatocellular carcinoma tissues of the patients with TNM stage I-II,well-moderately differentiated cancer and no lymph node metastasis.The serum content of AFP,TK1,GP73 and ASPH in the hepatocellular carcinoma patients was significantly higher than that in the control group and positively correlated withTLR4, MyD88andNF-κBmRNA levels.Conclusions In hepatocellular carcinoma,TLR4 pathway function is enhanced and closely related to clinicopathological stage and content of serum tumor markers.

liver cancer;Toll-like receptor 4;signaling pathway;tumor marker

R735.7

A

10.3969/j.issn.1005-8982.2017.04.011

1005-8982（2017）04-0055-04

2016-03-23