徐明堂，张秀智，赵 静，张淑艳，陈 琛，杨 帆，赵焕芬

介绍一种脂肪染色
——油红滴染法

徐明堂，张秀智，赵 静，张淑艳，陈 琛，杨 帆，赵焕芬

脂肪染色；滴染法；浸染法

油红染色在病理科作为脂肪特殊染色应用，传统方法一般为浸染法。根据本科室的工作情况，实验改用滴染法，配成的工作液也可以重复使用，效果良好，现介绍如下。

1 材料与方法

1.1 材料 1%油红液：1 g油红，溶于纯异戊醇或无水乙醇100 mL。工作液：取储存液1 mL(VP管)，加2～3滴蒸馏水，混匀，形成悬浊液，密封，2 000 r/min离心10 min。

1.2 标本 常规冷冻切片，包括甲状腺组织、胆囊、乳腺组织、子宫、卵巢肿瘤等129例。

1.3 仪器耗材 微波炉(美的家用型MP23C-BF，输出功率600 W)，密封性良好的染色盒，盖玻片，水溶性封片胶。

1.4 操作方法 (1)常规冷冻切片(7 μm厚)。不能当日染色的于-20 ℃冻存，冻存不超过5天。(2)染色时取出切片、恢复室温，平放，上滴加工作液离心后的上层液，上封盖玻片，置入密封的染色盒内，计时12～13 min。(3)去除盖玻片，直接自来水浸洗，去除多余染液。(4)滴加苏木精染液1～2 min，流水浸洗。(5)常规盐酸乙醇分化及氨水返蓝。(6)阴干。水溶性封片胶呈胶冻状，置微波炉最高功率作用5～10 s，由胶冻状变为液态后，封固。

2 结果

脂肪成分：细胞内中性脂肪呈红色颗粒，而大的脂肪团块则呈大的红色团块。在背景上还可能出现一些油红析出的絮状物或颗粒，核呈蓝色(图1、2)。

3 讨论

脂肪染色实际操作、文献介绍基本上是浸染法，并且在改良的染色方法中，多是降低乙醇的浓度，并且要求染色前过滤[1-3]。本文介绍的滴染法基本上遵循了这种思路，但采用了滴染法，节省了试剂，可重复使用，操作简便，该方法也可以用以培养爬片细胞的脂肪染色。

图1 卵巢肿瘤：A.HE染色；B.油红O染色，滴染法 图2 培养细胞的脂肪染色，细胞内脂肪呈大小不一颗粒，油红O滴染法

3.1 配制油红饱和液 脂肪染色的原理是利用了油红O溶于脂质的特点，从溶液中转移到组织的脂肪成分中，使其呈油红的颜色，该过程是从染液介质转移到组织脂肪介质的过程，两种介质之间油红浓度相差越大，则转移渗透速度越快，组织脂肪内渗透汇集的油红量也越多。脂肪内油红量越大，呈色越浓艳，因此制作出乙醇或异戊醇的油红饱和液，无疑是提高染液中油红浓度的最佳方法。

用无水乙醇或异戊醇溶解油红，使之呈完全溶解、游离，并且可做为原液长期保存。制作工作液时，原液加水，实际上就是降低乙醇浓度，使油红溶解度降低，并趋于相应乙醇或异戊醇浓度的饱和状态。饱和后，多余的油红将析出；也只有油红析出了，才标志着染液中油红浓度达到了饱和状态。由于无水乙醇或异戊醇本身也会溶解组织中脂肪，所以原液中加水，降低其浓度，也降低了其溶脂能力，防止组织中脂肪的溶解，所以原液加水非常必要。但饱和析出的油红成固体颗粒状，使染液呈悬浊液状态，用这种状态的染液做脂肪染色，虽能染出组织中脂肪，但背景会沉积很多大小不一的油红颗粒(呈黑色)，如果颗粒太多，就会影响镜下结果观察。文献中提出的过滤方法，实际上就是过滤掉析出的油红颗粒[4]。

3.2 离心取代过滤及注意事项 如果配制较多的工作液，进行过滤是可行的，但量少时进行过滤，实际效果不佳。而离心取上层液对配制少量染液也不错。油红饱和状态的工作液，离心时油红颗粒沉淀底层，而上层液将是饱和无颗粒油红液。工作液量少时，无法进行浸染，只适合滴染。但滴染过程中又会面临染液挥发问题。染液挥发实际上挥发的是溶剂：乙醇或异戊醇。本已饱和的油红液，由于乙醇或异戊醇挥发，再次析出，将直接沉淀到组织表面，同样影响结果观察。所以阻止染色过程中染液挥发具有必要性。本科室用盖玻片封盖及置封闭的染色盒中，正是基于该认识；如果用95%乙醇滴到盒盖周边，封闭效果更好。在用盖玻片封盖时，滴加的染液量要充分些，让盖玻片能够浮在液面上；量少时会紧贴在组织表面，不利于染色完毕后移除盖玻片。

3.3 重复使用 1～2 mL的工作液，可直接在2 mL的VP管中配制，配制完成或染色剩余者密封，阻止乙醇液或异戊醇挥发，油红悬浊液可以保持数日。使用时仍离心取上层液，进行染色，效果无变化。

[1] 王德田, 董建强. 实用现代病理学技术[M]. 北京: 中国协和医科大学出版社, 2012:114-117.

[2] 中华医学会. 临床技术操作规范·病理学分册[M]. 北京: 人民军医出版社, 2004:162-163.

[3] 汪 伟, 张 萍, 邹玉蓉, 等. 介绍一种改良的肾组织脂肪染色技术[J]. 临床与实验病理学杂志, 2010,26(3):377.

[4] 熊红梅, 兰玉华, 邱晓明. 脂肪染色的改良及应用[J]. 诊断病理学杂志, 2012,19(1):72.

时间：2017-2-27 10:14

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徐明堂，男，副主任技师。Tel: (0311)85988122，E-mail: xmingtang@126.com

R 361.2

B

1001-7399(2017)02-0221-02

10.13315/j.cnki.cjcep.2017.02.028

接受日期：2016-10-10