姚德祥+杜作东+黎小鹏

摘要 研究了动物肝脏中3种β-受体激动剂（包括盐酸克倫特罗、沙丁胺醇、莱克多巴胺）残留量的气相色谱-质谱测定方法。样品经乙酸铵、乙酸乙酯∶异丙醇（6∶4）提取，PCX阳离子交换柱净化，再经BSTFA衍生，HP-5MS毛细管柱分离，基质匹配内标法定量。结果表明：3种β-受体激动剂在1.0～20.0 μg/L浓度范围内均有良好的线性关系，相关系数不低于0.998，在17.5 min内获得良好的分离，3种β-受体激动剂加标回收率为85.4%～106.7%，相对标准偏差在4.9%～10.5%之间（n=6） 。

关键词 气相色谱-质谱法；动物肝脏；盐酸克伦特罗；沙丁胺醇；莱克多巴胺

中图分类号 X839.2；TS207.5 文献标识码 A 文章编号 1007-5739（2016）23-0244-02

Abstract A Gas Chromatography-Mass Spectrometry method was developed for rapid determination of 3 β-agonists residue（including clenbuterol，salbutamol，ractopamine） in pig liver.The samples were extracted with ammonium acetate，ethyl acetate∶isopropanol（6∶4） and cleaned up by PXC column.The targer compounds were derivatized with BSTFA and detected by GC-MS.A matrix matched internal standard was used for quantitative analysis.The results showed that three β-agonists well separated within 17.5 min.The calibration curves were in good linearity between the peak area and the concentration of 1.0～20.0 μg/L for 3 β-agonists with correlation coefficients not less than 0.998.The spiked recoveries ranged from 85.4% to 106.7% with RSD′s in the range of 4.9%-10.5% （n=6）.

Key words GC-MS；animal liver；clenbuterol；salbutamol；ractopamine

β-受体激动剂又叫瘦肉精，是一类结构功能类似于肾上腺素和去甲肾上腺素的苯乙醇类衍生物[1]，是一种拟交感神经作用药，具有松弛平滑肌、支气管扩张等作用，常用来治疗支气管哮喘等疾病[2]。其能够用来改善动物养分的代谢途径，促进动物肌肉的合成，抑制脂肪合成的积累，即具有营养“再分配效应”[3]，被不法商家添加于动物饲料中，用以减少动物脂肪含量，提高畜禽产品瘦肉率。但是食用含有瘦肉精的畜禽会严重危害人类健康，我国已经明确将其列入禁用药品目录。

目前，有关β-受体激动剂的分析检测方法有液相色谱[4]、（气相、液相）色谱-质谱法[5-6]、免疫吸附法[7]等。本文利用固相萃取/气相色谱-质谱法对动物肝脏中盐酸克伦特罗、沙丁胺醇、莱克多巴胺3种β-受体激动剂进行测定，该方法前处理简单，回收率和精密度均较好。

1 材料与方法

1.1 仪器与试剂

IKA T18匀浆机（德国IKA公司），固相萃取装置，Ohaus先行者百分之一天平（奥豪斯仪器（上海）有限公司），Poxwar漩涡混合器（苏州珀西瓦尔实验设备有限公司），海科氮吹仪（青岛海科仪器有限公司），固相萃取装置，Agilent 7890A-5977型气相色谱质谱联用仪（美国安捷伦公司）。氯化钠、分析纯异丙醇、乙酸乙酯、高氯酸、氢氧化钠、氨水、乙酸铵，以上均为分析纯，均由广州化学试剂厂生产；色谱纯甲苯由德国Merck公司生产；衍生剂BSTFA由美国Supelco公司生产；60 mg 3 mL PCX固相萃取小柱由美国Waters公司生产。

盐酸克伦特罗、沙丁胺醇、莱克多巴胺3种β-受体激动剂标准品均购自德国Dr.Ehrenstorfer，用甲醇将其分别配制成1 000 mg/L标准溶液，使用前用甲醇稀释成所需浓度的混标工作液。

1.2 试验方法

1.2.1 样品的提取与净化。将肝脏（猪肝、牛肝）用绞肉机绞碎后，称取5.0 g（精确到0.01 g）到50 mL塑料离心管中，加入50 μL内标液，10.0 mL（pH=5.2）的乙酸铵溶液，用高氯酸溶液调节pH值至1.0±0.2，高速涡旋3 min后，离心（8 000 r/min）3 min，收集上清液到50 mL塑料离心管中，往固体沉淀加入5 mL（pH=5.2）的乙酸铵溶液高速涡旋3 min，再次离心，合并2次乙酸铵提取液。用10 mol/L氢氧化钠调节pH值至10.0±0.2，离心（8 000 r/min）3 min。

将上清液转移到装有8 g氯化钠的100 mL塑料离心管中，加入15 mL乙酸乙酯-异丙醇（6∶4）高速涡旋3 min，离心（8 000 r/min）3 min。提取上层有机层至15 mL玻璃试管中，氮吹。同时再加入10 mL乙酸乙酯-异丙醇（6∶4）进行第2次萃取，离心后合并所有有机提取液，继续氮吹至近干。加入3 mL（pH=5.2）的乙酸铵溶液，漩涡振荡后待净化。

PCX小柱依次用5.0 mL甲醇、2.0 mL水和4.0 mL 30 mmol盐酸溶液预淋洗活化，然后倒入上述待净化液，依次用4.0 mL水、4.0 mL甲醇洗脱，吹干柱中残液，去掉洗脱液，最后加入5.0 mL氨化甲醇洗脱，用10 mL带旋塞的玻璃试管收集滤出液。将收集滤出液的试管置于氮吹仪，于55 ℃氮吹至全干，不盖盖子在80 ℃烘箱中进一步鼓风烘干20 min，待试管恢复至室温，分别加入100 μL甲苯和100 μL BSTFA盖上盖子漩涡混合2 min，于80 ℃烘箱中衍生反应1 h，待试管恢复至室温，转移至带有内插管的进样瓶中，供气相色谱-质谱联用仪测定。

1.2.2 色谱条件。色谱柱：HP-5MS毛细管柱（30.0 m×0.250 mm×0.25 μm）；进样体积：1 μL；进样方式：不分流进样；进样口温度：220 ℃；载气及流速：氮气0.8 mL/min；程序柱温：70 ℃保持0.6 min，以25 ℃/min升温至200 ℃，保持4 min，再以15 ℃/min升温至280 ℃，保持5 min；GC/MS传输线温度：280 ℃。检测器及温度：EI离子源220 ℃，四级杆160 ℃；定量方法：内标法。

2 结果与分析

2.1 3种β-受体激动剂的标准色谱图

试验选用HP-5MS柱作为分析用色谱柱，通过综合考虑3种待测β-受体激动剂的理化性质，对气相色谱-质谱联用仪的升温程序进行优化，得到1.2.2中所述色谱条件，用该条件测得3种β-受体激动剂标准色谱图（图1），结果表明，3种待测β-受体激动剂在17.5 min内得到良好分离，能满足动物肝脏中β-受体激动剂残留分析要求。

2.2 标准曲线、线性范围及检出限

为消除基质效应对测定结果的影响，试验采用空白样品添加标准工作液的方法制备标准工作曲线，盐酸克伦特罗、沙丁胺醇添加浓度分别为1.0、2.0、5.0、10.0、20.0 μg/kg，莱克多巴胺添加浓度分别为2.0、4.0、10.0、20.0、40.0 μg/kg。绘制出标准曲线，回归方程及相关系数见表1。3种待测β-受体激动剂均呈良好线性关系，r2均大于0.998。

2.3 回收率和精密度

按照1.2的提取净化方法和色谱条件，采用标准加入法，在空白肝脏（猪肝、牛肝）样品中添加3.0 μg/kg（莱克多巴胺6.0 μg/kg）和8.0 μg/kg（莱克多巴胺16.0 μg/kg）2种水平的3种β-受体激动剂混合标样进行加标回收试验，并进行6个样品的重复测定，3种β-受体激动剂的平均加标回收率在85.4%～106.7%之间，其相对标准偏差在4.9%～10.5%之间。方法回收率和精密度均能满足试验要求。

3 结论与讨论

本文建立了气相色谱-质谱法测定动物肝脏中多种β-受体激动剂残留量的分析方法。该方法简单、回收率高，采用PCX小柱可以提高柱层析效率，方法准确度和精密度均能满足兽药残留分析检测的要求，适合于猪肝、牛肝中多种β-受体激动剂残留的测定。

4 參考文献

[1] 梁晓聪，程国霞，朱参胜.GC/MS法同时测定动物组织中4种β-兴奋剂残留量[J].中国卫生检验杂志，2008，18（2）：199-200.

[2] 聂国荣.β-受体激动剂正副作用及检测方法[J].中国动物检疫，2001，18（6）：43-44.

[3] 丁焕中，陈杖榴，杨志凌.营养重分配剂莱克多巴胺的药理作用和应用[J].兽药与饲料添加剂，2002，7（1）：18-20.

[4] 尚红霞，卢业玉，黄宝华，等.固相萃取-高效液相色谱法同时测定克伦特罗和沙丁胺醇[J].分析科学学报，2003，19（2）：145-147.

[5] 孔莹，邱月明，李鹏，等.固相萃取/气相色谱-质谱同时测定猪肉中4种β-激动剂类药物残留量[J].分析测试学报，2006，25（2）：63-66.

[6] 余建新，胡小钟，余纯，等.HPLC/MS测定动物组织及尿样中的β-兴奋剂[J].分析测试技术与仪器，2004，10（4）：244-247.

[7] 万宇平，刘宁，陶光灿，等.组织中β-兴奋剂类药物多残留酶联免疫检测方法的建立[J].河南农业科学，2013，42（2）：132-135.