王亚男+王玲燕+曲郁虹+姜明+武玉卓+李瑞+邱博琳+王素娟+林生

[摘要]通过正相硅胶、Sephadex LH-20和反相HPLC色谱分离方法相结合，从华南木姜子树枝乙醇提取物的乙酸乙酯部位中分离得到1个新苯乙烯二聚体衍生物（1），经IR，UV， MS和NMR（1D和2D NMR）波谱学方法鉴定为（E）-2，4-双（对-羟基苯基）-2-丁烯醇[（E）-2，4-bis（p-hydroxyphenyl）-2-butenol]，命名为木姜子醇（listeanol）。在1×10^-5mol · L^-1浓度下，它在肿瘤细胞毒（MTT法，HCT-8，Bel-7402，BGC-823，A549，A2780细胞株）、抗氧化（Fe^2+_Cys诱导大鼠肝微粒体脂质过氧化模型）、神经保护（去血清和谷氨酸损伤模型）和抗糖尿病（PTPIB酶抑制模型）体外模型上均未显示出显著药理活性。

[关键词] 华南木姜子； 化学成分； 苯乙烯二聚体衍生物

[Abstract] A new styrene dimer derivative has been isolated from the branch of Litsea greenmaniana by column chromatography over silica gel and Sephadex LH-20， as well as semi-preparative HPLC. Its structure was identified by spectroscopic data analysis （MS， UV， IR， 1D and 2D NMR） as （E）-2，4-bis（p-hydroxyphenyl）-2-butenol， named as listeanol. At a concentration of 1×10^-5 mol·L^-1， compound 1 was inactive in the assays， including cytotoxicity against human tumor cell lines （HCT-8， Bel-7402， BGC-823， A549 and A2780）， antioxidant activity in Fe²⁺-cystine-induced rat liver microsomal lipid peroxidation， neuroprotective activity against serum deprivation or glutamate induced neurotoxicity in cultures of PC12 cells， and the inhibitory activity against protein tyrosine phosphatase 1B （PTP1B）.

[Key words] Litsea greenmaniana； chemical constituents； styrene dimer derivative

樟科Lauraceae木姜子Litsea属植物全世界约有200余种，在我国约有72种18变种和3变型，是我国樟科中种类较多，分布较广的属之一^[1]。本属植物入药的达17种，如山鸡椒L. cubeba的果实和枝叶具有温中散寒、消肿化瘀、行气止痛的功效，其干燥成熟果实又称畢澄茄，收载于2015年版《中国药典》^[2]；杨叶木姜子L. populifoliu民间用于胃寒腹痛、食滞饱胀的治疗；木姜子L. pungens和宜昌木姜子L. ichangensis均用于风寒湿痛、跌打肿痛和食积气滞的治疗，外用于疮毒肿痛；豺皮樟L. rotundifolia对风湿性关节炎、腰腿疼、痛经和消化不良有疗效^[3]。华南木姜子L. greenmaniana多生于山谷杂木林中，海拔1 200 m以下，在我国的广东、广西、福建分布较广^[4]。国内外文献未见华南木姜子药理活性和化学成分的研究报道。为了深入研究华南木姜子中的活性成分，作者前期已对华南木姜子的木脂素、多巴胺和阿朴菲生物碱类成分进行了研究^[5-6]，本文报道从华南木姜子95%乙醇提取物的乙酸乙酯部位中分离得到的1个新的苯乙烯二聚体衍生物，（E）-2，4-双（对-羟基苯基）-2-丁烯醇（1），命名为木姜子醇（listeanol）。

1 材料

Micromass Auto spc-Ultima ETOF质谱仪（美国Micromass公司），Nicolet 5700 FT-IR红外光谱仪（溴化钾压片），Inova-500型核磁共振光谱仪（美国Varian公司），Agilent HP1100型高效液相色谱仪，Rp C₁₈ （10 mm×250 mm，5 μm）半制备型HPLC色谱柱 （Agilent公司），羟丙基葡聚糖凝胶Sephadex LH-20 （Amersham Biosciences），色谱用硅胶和硅胶预制板（青岛海洋化工集团公司）。所用试剂若无特别说明均购自北京化工厂，级别为分析纯或色谱纯。

华南木姜子枝于2006年8月采自广西大瑶山，由广西林业局龙光日工程师鉴定为华南木姜子L. greenmaniana，标本现存于中国医学科学院药物研究所植物标本室（YG06010）。

2 提取分离

华南木姜子枝1.5 kg 用95%乙醇回流提取3次，每次3 h，提取液减压浓缩得浸膏94.4 g。将浸膏分散于500 mL水中，用乙酸乙酯（1∶1）萃取5次，萃取液合并浓缩，得乙酸乙酯相（49.0 g）和水相（12.3 g）。乙酸乙酯相拌样，经硅胶柱色谱分离，用氯仿-甲醇（100∶1～1∶1）梯度洗脱，洗脱液经薄层色谱检测，合并相同组分，回收溶剂得到A～K共12个组分。E组分经Sephadex LH-20柱色谱，氯仿-甲醇（1∶1）洗脱，洗脱液经薄层色谱检测，合并相同组分，回收溶剂得E1-E5。E3经反相HPLC半制备色谱纯化分离（甲醇-水70∶30，2 mL·min^-1），得化合物1（12 mg，tR =16.8 min）。

3 结构鉴定

化合物1 黄色油状物，UV （MeOH） λ_max （logε） nm： 205，227，277 （sh）； IR （KBr） ν_max 3 404，3 231，3 026，2 893，1 609，1 597，1 514，1 452，1 363，1 248，1 175，1 001，938，843，783 cm^-1。表明结构中存在有羟基和芳环基团。（-）-ESI-MS给出准分子离子峰m/z 255 [M-H]^-和511 [2M-H]^-，高分辨（-）-ESI-MS给出准分子离子的精确质核比为m/z 255.102 4 [M-H]^-（计算值255.102 7，分子式为C₁₆H₁₅O₃），提示1的分子组成为C₁₆H₁₆O₃，不饱和度为9。化合物1 的1H-NMR （Me₂CO-D₆，500 MHz） 谱显示可归属于2组AA′BB′偶合的苯环质子共振信号δ_H 6.97 （2H，d，J=9.0 Hz，H-6，10），6.72 （2H，d，J=9.0 Hz，H-7，9），7.10 （2H，d，J=8.5 Hz，H-2′，6′）和6.82 （2H，d，J=8.5 Hz，H-3′，5′），1个三取代烯烃质子信号δ_H 5.81 （1H，t，J=8.0 Hz，H-3），2个亚甲基质子信号δ_H 4.23 （2H，d，J=6.5 Hz，H-1）和3.24 （2H，d，J=8.0 Hz，H-4），以及2个酚羟基和1个醇羟基活泼氢质子信号δ_H 8.28，8.04 （each 1H，s，4′，8-OH），δ_H 3.84 （1H，t，J=6.0 Hz，1-OH）。由以上数据结合其¹³C-NMR数据推断化合物1为含有2个对羟基取代苯基，1个三取代双键，1个连氧亚甲基和1个非连氧亚甲基片段，见表1。

通过HSQC对化合物1的¹H和¹³C-NMR进行准确归属后，其结构通过HMBC进行确证，见图1。在化合物1的HMBC谱中，δ_H8.04 （1H，s，8-OH）与δ_C156.4 （C-8）、116.0 （C-7，9）存在相关；δ_H8.28 （1H，s，4′-OH）与δ_C157.3 （C-4′）、115.7 （C-3′，5′）存在相关，同时结合他们的化学位移，证实了2个对羟基取代苯基的存在。烯烃质子H-3与C-1和C-4、C-5和C-1′存在相关；H-1与C-1′、C-3存在相关；H-4与C-2，C-3和C-6（C-10）存在相关；H-2′（H-6′）与C-2的相关，以及1-OH与C-1和C-2的相关，结合这些质子和碳的化学位移以及质子的偶合方式，确定化合物1的结构为2，4-双（4-羟基苯）-2-丁烯醇。其双键的构型进一步通过一维NOE差谱进行确定，见图1。当照射烯烃质子H-3，显示H₂-1有增益；照射H-4，显示H-2′和H-6′分别存在增益，说明烯氢（H-3）与连氧亚甲基（H-1）处于双键同侧，而非连氧亚甲基（H-4）与对羟基苯基处于双键的另一侧。综上所述，化合物确定为（E）-2，4-双（对-羟基苯基）-2-丁烯醇[（E）-2，4-bis（p-hydroxyphenyl）-2-butenol]，命名为木姜子醇（listeanol）。

化合物1分别进行了抗肿瘤（MTT法，HCT-8，Bel-7402，BGC-823，A549，A2780细胞株）^[7]、抗氧化（Fe²⁺-Cys诱导大鼠肝微粒体脂质过氧化模型）^[8]、神经保护（去血清和谷氨酸模型）^[9-10]和抗糖尿病（PTPIB酶抑制模型）^[11]药理活性的筛选，在1×10^-5 mol · L^-1浓度下，均未显示出活性。

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[责任编辑 丁广治]