徐卫东+罗红梅+喻建平

【摘 要】目的：通过观察活络效灵丹对啤酒诱发痛风模型大鼠的影响，对活络效灵丹治疗痛风的疗效及机制进行探索。方法：将60只雄性SD大鼠随机分为空白对照组，造模啤酒组，加味活络效灵丹高、中、低剂量组，每组12只。除空白对照组外，其余各组大鼠注射尿酸钠诱导痛风模型。空白对照组给予生理盐水灌胃，其余各组均给予啤酒灌胃，加味活络效灵丹高、中、低剂量组同时予以加味活络效灵丹汤液高、中、低剂量灌胃。观察各组大鼠的饮食、二便、毛色、精神状态及活动情况，受试关节周径变化；ELISA法检测关节组织中白细胞介素-1β（IL-1β）的水平。结果：与造模啤酒组比较，加味活络效灵丹高、中、低各剂量组大鼠的饮食、二便、毛色、精神状态及活动情况均有所改善。与空白对照组比较，造模啤酒组大鼠的受试关节周径有所增加（P < 0.05）；与造模啤酒组比较，加味活络效灵丹高、中、低各剂量组大鼠的受試关节周径均有所减少（P < 0.05）。与空白对照组比较，造模啤酒组大鼠的关节组织中IL-1β的表达有所增加（P < 0.05）；与造模啤酒组比较，加味活络效灵丹高、中、低各剂量组大鼠的关节组织中IL-1β的表达均有所降低（P < 0.05）。结论：加味活络效灵丹可通过降低关节组织中IL-1β的表达而起到治疗痛风的作用。

【关键词】 痛风；高尿酸血症；活络效灵丹；IL-1β；大鼠

Effect of Modified Huoluo Xiaoling Dan（活络效灵丹）on the Expression of IL-1β in Tissue of Beer-induced

Gout Rat Models

XU Wei-dong，LUO Hong-mei，YU Jian-ping

【ABSTRACT】Objective：To probe the therapeutic mechanism of Huoluo Xiaoling Dan（活络效灵丹）

by observing its effect on beer-induced gout rat models.Methods：Sixty male SD rats were randomly divided into a blank control group，a beer model group，and high-dose，medium-dose and low-dose groups of Huoluo Xiaoling Dan，12 rats in each group.Except the blank control group，the rats in the other groups were induced by sodium urate injection to establish gout models.The blank control group was given intragastric administration of normal saline，while the other groups were given intragastric administration of beer.At the same time，the high-dose，medium-dose and low-dose groups were also given intragastric administration of corresponding doses of modified Huoluo Xiaoling Dan.An observation was made on the rats diet，urine，stool，hair color，mental state，activity and the circumference of subject joints.ELISA method was used to detect the level of IL-1β in the joint tissue.Results：Compared with the beer model group，the diet，urine，stool，hair color，mental state and activity of rats in the three groups of modified Huoluo Xiaoling Dan were improved to a certain degree.Compared with the blank control group，the joint circumference of rats in the beer model group increased to a certain degree

（P < 0.05）.Compared with the beer model group，the joint circumference of rats in the high-dose，medium-dose and low-dose groups decreased to a certain degree（P < 0.05）.Compared with the blank control group，the expression of IL-1β

in the beer model group increased to a certain degree（P < 0.05）.Compared with the beer model group，the expression of IL-1β in the high-dose，medium-dose and low-dose groups decreased to a certain degree （P < 0.05）.Conclusion：Modified Huoluo Xiaoling Dan treats gout by reducing the expression of IL-1β in the joint tissue.

【Keywords】 gout；hyperuricemia；Huoluo Xiaoling Dan（活络效灵丹）；IL-1β；rats

痛风性关节炎是嘌呤代谢紊乱和（或）尿酸排泄减少引起的一种晶体性关节炎，临床特点为反复发作的急性关节炎、痛风石沉积、痛风石性慢性关节炎和关节畸形，并且常累及肾和心脏，并引起多脏器损伤。我国痛风发病率达0.26%～0.34%。痛风的急性发作往往存在一定的诱因，目前认为高嘌呤饮食与其急性发作密切相关，有更进一步的报道显示，在痛风的发病过程中，痛风急性发作的诱发因素依次为暴饮暴食，特别是酗酒和高嘌呤饮食（25.4%）、劳累（12.6%）、感染（7.2%）、受凉（5.8%）、外伤（5.1%）等[1-4]。从临床观察来看，饮用啤酒和高嘌呤饮食是最常见的外界诱发因素。已有的临床报告表明，活络效灵丹方加减治疗痛风性关节炎有一定疗效[5-6]。但目前痛风发病的具體作用机制还不清楚。本研究拟通过观察活络效灵丹对啤酒诱发痛风模型大鼠的影响及其对关节组织中白细胞介素-1β（IL-1β）表达的影响，以揭示加味活络效灵丹治疗痛风性关节炎的药理机制，为其进一步的研究开发奠定基础。

1 实验材料

1.1 实验动物 4周龄SPF级SD大鼠60只，雄性，体质量280～300 g，动物合格证号：SCXK（沪）2011-0003。实验动物由江西中医药大学实验动物中心提供。

1.2 主要试剂与仪器 大鼠IL-1β酶联免疫吸附试验（ELISA）试剂盒（上海西唐生物科技有限公司）；南昌啤酒，乙醇8%vol；酶标仪、洗板机（BIO-RAD公司）；微量移液器（德国Eppendorf公司）；超纯水仪（Millipore公司）。

1.3 药 物 加味活络效灵丹药物组成：金银花10 g、山慈菇10 g、当归10 g、丹参10 g、制乳香10 g、制没药10 g。由本院药剂科制剂室制成棕褐色药液，每100 mL含中药饮片生药360 g。

2 方 法

2.1 动物分组 将60只SD大鼠随机分为空白对照组，造模啤酒组，加味活络效灵丹高、中、低剂量组，每组12只。

2.2 造模方法 除空白对照组外，其余各组大鼠以碘酒、酒精消毒局部，用6号灭菌注射针在大鼠右侧踝关节背侧，从45°方向插入至胫骨肌腱内侧，将尿酸钠溶液0.2 mL注入到关节腔，制备大鼠痛风模型。

2.3 尿酸钠溶液制备方法 388 mL蒸馏水加12 mL

体积分数为1 mol·L-1的NaOH，煮沸后，加入

2 g尿酸，用HCL调pH至7.2，搅拌冷却，4 ℃冰箱保存24 h，去上清液，用滤纸将沉淀物水分吸干，放入干燥箱（温度70 ℃）烘2 h，取出，刮下粉末，放入研钵研成细末，制成尿酸钠结晶。动物造模前，取500 mg尿酸钠结晶加18 mL生理盐水，再加

2 mL吐温80，加热搅拌，配成20 mL尿酸钠溶液。

2.4 给药方法 所有大鼠均于造模当天开始灌胃。空白对照组以生理盐水2 mL·（100 g）-1·d-1灌胃；造模啤酒组给予啤酒9 mL·kg-1·d-1灌胃；加味活络效灵丹高剂量组给予啤酒9 mL·kg-1·d-1、

加味活络效灵丹汤48 g·kg-1·d-1灌胃；加味活络效灵丹中剂量组给予啤酒9 mL·kg-1·d-1、加味活络效灵丹汤24 g·kg-1·d-1灌胃；加味活络效灵丹低剂量组给予啤酒9 mL·kg-1·d-1、加味活络效灵丹汤12 g·kg-1·d-1灌胃。连续灌胃7 d后断头处死所有大鼠，并取右侧后肢，低温冷冻保存备用。

2.5 观察指标 观察大鼠的饮食、二便、毛色、精神状态及活动情况。所有大鼠均在造模前1 d，用软皮尺测量各鼠右后肢踝关节周径，在处死动物前，再用软皮尺在前次相同部位测量关节周径。比较各组动物造模前后关节周径的增大程度。

2.6 实验室指标检测 取低温保存的踝关节组织100 mg置于研钵中，加液氮研成粉末后，加入

1 mL生理盐水，充分匀浆，取上清液，采用ELISA法检测IL-1β的水平。

2.7 统计学方法 采用SPSS 19.0软件进行统计分析。计量资料以表示，采用t检验。以P < 0.05为差异有统计学意义。

3 结 果

3.1 大鼠一般情况 造模啤酒组大鼠饮食减少、二便减少、毛色粗糙、精神萎靡及活动减少。与造模啤酒组比较，加味活络效灵丹高、中、低各剂量组大鼠的饮食、二便、毛色、精神状态及活动情况均有所改善，以加味活络效灵丹高剂量组改善最为明显。

3.2 各组大鼠关节周径比较 与空白对照组比较，造模啤酒组大鼠的受试关节周径增加（P < 0.05）；

与造模啤酒组比较，加味活络效灵丹高、中、低各剂量组大鼠的受试关节周径均有所减小

（P < 0.05）。

3.3 各组大鼠关节组织中IL-1β的表达比较 与空白对照组比较，造模啤酒组大鼠的关节组织中IL-1β的表达升高（P < 0.05）；与造模啤酒组比较，加味活络效灵丹高、中、低各剂量组大鼠的关节组织中IL-1β的表达均有所降低（P < 0.05）。

4 讨 论

痛风的发病主要与血尿酸水平相关，并受到一些环境及情绪因素的影响，约有5%～18.8%的高尿酸患者发展为痛风，发展成痛风或肾病变的几率与血尿酸值或持续时间呈正比。临床上仅有很少一部分高尿酸血症患者出现尿酸盐沉积或痛风石，这可能与体内环境，如温度和pH值的改变、关节局部创伤、感染等因素相关。目前认为，痛风的急性发作往往与高嘌呤饮食（如饮用啤酒）等诱因密切相关[7-12]。最近，在尿酸盐结晶介导的自身炎症反应研究方面有了重要进展。尿酸盐结晶通过各种机制激发固有免疫应答并参与诱导获得性免疫。目前已证实尿酸钠晶体作为一种危险信号，被固有免疫执行细胞所带有的模式识别受体（PRRS）所识别，启动固有免疫，经胞内一系列的信号转导，最终激活IL-1和IL-18，诱导炎症反应。IL-1β的产生为尿酸钠晶体导致的炎症级联反应的早期。活化的IL-1β通过激活IL-1受体（IL-1R）使趋化因子和其他炎症调节因子发挥作用，导致中性粒细胞进入关节等尿酸盐沉积部位，并能使机体产生发热反应，导致痛风的炎症产生[13]。

中医学认为，痛风是由于内有营卫失调，气血亏损，复感风寒湿热之邪，或饮酒纵欲而感风寒湿之邪，导致经脉结滞，血气不行，四肢关节为病邪闭阻，不通则痛。故此，“瘀”在痛风的发病中处于重要位置。治疗上也以活血化瘀、通络止痛为原则。活络效灵丹出自张锡纯的《医学衷中参西录》，组成为当归、丹参、生明乳香、生明没药。原文述：“治气血凝滞，癖瘕，心腹疼痛，腿疼臂疼，内外疮疡，一切脏腑积聚，经络湮瘀。”有实验研究表明，当归及其有效成分阿魏酸具有明显的抑制巨噬细胞活化、抑制花生四烯酸代谢等抗炎药理作用。丹参中有效成分丹参素可抑制血小板血栓素A2合成和释放的前列腺素类缩血管物质。对乳香提取物进行实验研究发现，乳香提取物能减轻膝关节炎疼痛，增强骨关节的屈伸以减少关节部位的隆突，并有修复功能[14-16]。

本研究发现，与空白对照组比较，造模啤酒组大鼠的受试关节周径有所增加，关节组织中IL-1β的表达有所增加，差异均有统计学意义（P < 0.05）。说明饮用啤酒确能诱发痛风急性发作。同时，与造模啤酒组比较，加味活络效灵丹高、中、低各剂量组大鼠的饮食、二便、毛色、精神状态及活动情况均有所改善，大鼠的受试关节周径均有所减小，大鼠关节组织中IL-1β的表达均有所降低，差异均有统计学意义

（P < 0.05）。上述结果表明，加味活络效灵丹可通过降低关节组织中IL-1β的表达而起到治疗痛风的作用。

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收稿日期：2016-06-23；修回日期：2016-12-22