董金杰 王 凡 陈苗苗 牟克斌 王超英 刘 萍*

（①中农威特生物科技股份有限公司 兰州 730046 ①中国农业科学院兰州兽医研究所 兰州）

口蹄疫灭活疫苗146S含量检测方法概述

董金杰①①王 凡①陈苗苗①牟克斌①①王超英①①刘 萍①*

（①中农威特生物科技股份有限公司 兰州 730046 ①中国农业科学院兰州兽医研究所 兰州）

口蹄疫(Food and Mouth Disease，FMD)是由口蹄疫病毒(Food and Mouth Disease Virus，FMDV)引起的偶蹄类动物的急性、热性、接触性、烈性传染病。世界范围内预防口蹄疫发生的有效方法是疫苗免疫，疫苗生产过程中，各环节过程控制至关重要，其中准确定量完整的口蹄疫病毒粒子(146S)尤为关键，因为146S抗原的含量直接决定了口蹄疫灭活疫苗的质量，所以准确，快速，敏感的定量方法势在必行，本文对146S含量检测主要方法的研究进展做一综述。

1 密度梯度离心法

主要有蔗糖密度梯度离心法和氯化铯密度梯度离心法两种，其中蔗糖密度梯度离心法应用较为广泛。

1.1 蔗糖密度梯度离心法 （1）该方法最早由Barteling等于1974年建，是采用10%～25%的蔗糖梯度，45000r/min离心30min，测定各部分在254nm处的吸光值，根据峰面积计算146S含量。但病毒液中146S含量太少时，不能直接检测，需要用PEG-6000对样品进行浓缩。最近几年，很多研究人员对此方法进行了改进。董金杰等(2010)将灭活的FMDV经超滤浓缩后分别加于15%～45%和15%～55%的蔗糖梯度顶部，35000/min，超速离心2.5h后，用紫外分光检测仪检测各区带在259nm处的吸光值，绘制吸收峰图谱，并计算峰的面积从而得到146S抗原的含量。试验结果表明，15%～45%的蔗糖梯度能较好的纯化FMDV抗原，分离效果比15%～55%蔗糖梯度更为理想。……