利用青霉素串珠试验来鉴定炭疽杆菌

2017-04-04山东省泰安市畜牧兽医局271000

山东畜牧兽医 2017年7期

关键词：平皿串珠肉汤

陈恒（山东省泰安市畜牧兽医局 271000）

利用青霉素串珠试验来鉴定炭疽杆菌

陈恒（山东省泰安市畜牧兽医局 271000）

青霉素串珠试验，对鉴定炭疽杆菌是一种较好的方法，故常用来鉴定可疑炭疽杆菌。

1 炭疽杆菌与串珠试验

（1）炭疽杆菌在普通肉汤或琼脂培养基上能繁殖成长链的长杆菌，炭疽杆菌的这种固有形态，主要是由于炭疽杆菌细胞最外一层比较厚而坚实的细胞壁所保持住的。炭疽杆菌在培养过程中，数小时便可以迅速地繁殖。其繁殖方法，是分裂繁殖的方法。即细菌体成熟后，以简单的横二分方式进行分裂繁殖，其分裂过程是细菌个体变粗，菌体变长，然后由细菌中部的细胞壁开始形成环状隔膜，隔膜渐伸入胞浆内，最后闭合，使菌体断裂，形成两个相同的个体。如果在培养中加入适当浓度的青霉素，当炭疽杆菌进行分裂繁殖时，便会受到青霉素的抑制作用。一般说来，进行炭疽杆菌串珠试验，每毫升培养基中加入青霉素量为0.05~0.1IU，再将炭疽杆菌移植进去，37℃培养3~4h，炭疽杆菌进行分裂繁殖时，能受到抑制作用。在此情况下，能使分裂的炭疽杆菌细胞壁不能闭合，在渗透压的作用下，长杆菌变成无细胞壁，胞浆由软的胞浆膜所包围而成珠状棒体，长链杆菌变成成串的圆珠状，故名曰串珠。（2）在每毫升含有0.05~0.1IU青霉素的培养基上，一般只有炭疽杆菌才能发生这种串珠状特征，所以可以利用这种串珠特征，来鉴别被检物是否炭疽杆菌。

2 琼脂法青霉素串珠试验

（1）按0.05~0.1IU/ml青霉素配制成琼脂培养基，趁热加于灭菌的载玻片上做成薄层，用灭菌白金耳沾取经37℃培养3~4h的肉汤新鲜培养物，滴加于琼脂薄层中央，将其放于灭菌平皿内，并于平皿内放一湿滤纸或棉球，保持平皿内的湿度，防止琼脂干燥。加盖，放入37℃温箱内培养3~4h，取出载玻片，用显微镜检查，能见到琼脂上有成串的圆珠细胞生长于琼脂表面，则为阳性，被检细菌为炭疽杆菌。如果琼脂表面所见的细菌，仍为长链杆菌，则为阴性，被检细菌则可否定为炭疽杆菌。（2）在判定时，往往由于培养基的营养、细菌培养物是否新鲜、青霉素浓度的准确性以及培养时间等，均可影响到串珠试验。阳性结果，均为大而圆的串珠。如果见到小圆或椭圆形细胞，可再继续培养0.5~1h，进行镜检。但培养时间过长，则细菌细胞体破裂而串珠消失。

3 肉汤法青霉素串珠试验

（1）用37℃培养3~4h的肉汤新鲜培养物，移种于0.5IU/ml的青霉素肉汤培养基中。接种的菌数，可以在高倍显微镜下检查每个视野见到几条几十条长链状杆菌为宜。将接种后的肉汤培养基，置于37℃水浴中培养1~1.5h后(如无水浴锅，使用培养箱亦可)，加入福尔马林，使肉汤含量为2%，加以固定，然后制成涂片，在未干燥时镜检。其结果判定同平板法。（2）肉汤法串珠试验时间较短，串珠一般不如平皿法检测出的圆而大。以上两种青霉素串珠试验，均应该用一株已知炭前天杆菌作对照。对照应为阳性，如果反应是阴性，不是青霉素浓度不准确，便是青霉素失效而影响结果的正确。

4 预防

（1）为了防止炭疽杆菌及牙胞体的蔓延，要妥善处理病死尸体。除诊断上必要的剖检和采取病料外，在一般情况下严禁剖检死于炭疽病的尸体。并深埋2m以下，掩埋地点应选择地势高燥地方，并应距离水井或水源200m以上的距离。（2）停止在污染牧场上放牧。（3）炭疽病污染区及受威胁区的家畜，每年应定期注射炭疽芽胞苗。（4）运往外地的生皮、毛、骨等畜产品，在运输前，须先经检验，或用环氧乙烷蒸气消毒。