袁文斌, 李长保, 焦海峰, 林志华, 包永波

(1. 浙江万里学院, 浙江 宁波 315100; 2. 宁波市海洋与渔业研究院, 浙江 宁波 315012)

厚壳贻贝(Mytiluscoruscus)属于双壳纲(Bivalvia),翼形亚纲(Pteriomorphia), 贻贝目(Mytioida)。也称淡菜, 海红, 中国古书上还称之为“东海夫人”[1], 主要分布于黄、渤海和东海沿岸[2], 野生厚壳贻贝多分布在外侧海岛低潮线下至 20 m之间的海底礁岩上[3],厚壳贻贝(Mytiluscoruscus)是渔山列岛重点保护的贝类资源之一, 也是当地重点采捕的种类之一, 由于其世代更替速度较慢, 大规模、高强度的采捕势必造成贻贝资源的减少。本文运用CO1基因分析对渔山列岛代表性潮间带生物厚壳贻贝进行遗传学研究,对五个地理群体(渔山、山东、大连、舟山、南麂)进行遗传多样性和单倍性分析等, 构建反映群间体关系的系统进化树, 观察不同群体的遗传多样性,探讨野生群体遗传多样性之间的差异, 从分子水平了解渔山列岛厚壳贻贝遗传背景。通过本课题的研究, 为渔山列岛其他海洋生物的恢复和保护提供了借鉴。

1　材料与方法

1.1　实验材料来源

贻贝: 5个地点的野生厚壳贻贝: 渔山列岛、大连獐子岛、南麂列岛、山东南隍城乡、舟山嵊泗。以上厚壳贻贝采集后活体运送至实验室, 取闭壳肌放于无水乙醇中, –20℃保存备用。

1.2　实验步骤

1.2.1基因组DNA的提取

用酚-氯仿法抽提各样品DNA。检测DNA完整性后, 放入–20℃保存备用。

1.2.2PCR扩增

采用常规PCR, 反应体系为25 μL, 其中12.5 μL taq master mix, 9 μL 双蒸水, 1.5 μL 模板, 上下引物各1 μL。PCR程序为: 94℃预变性10 min; 循环过程为: 94℃ 30 s, 55℃ 30 s, 72℃ 90 s, 35 个循环; 72℃延伸10 min, 引物序列为: CO1-F(5′-GGTCAACAAA TCATAAAGATATTGG-3′), CO1-R(5′-TAAACTTCA GGGTGACCAAAAAATCA-3′)。

1.2.3PCR产物鉴定

PCR产物在1%琼脂糖中电泳检测, 700 bp处出现单一亮条带则证明扩增成功。……