叶 荣

（湖北省十堰市郧西县疾控中心，湖北 十堰 442000）

1 实验

我们随机抽取50个切片样本，请医学中心病理科专科医师再次检查子宫颈切片检体。从子宫颈剥落上皮细胞检体中侦测人类乳突状病毒感染。以Nest-PCR侦测高危险性及低危险性人类乳突状病毒感染(HPV)检体及DNA萃取:

以子宫颈拭样棉棒取得子宫颈剥落上皮细胞后，将子宫颈拭样棉棒先浸润在5ml(PBS)缓冲液。然后，以酚－氯仿萃取检体DNA。首先，将含有子宫颈剥落上皮细胞的缓冲液加以搅拌以释出细胞，在室温下离心1500rpm15分钟，取细胞沉淀后加入500ul细胞溶解液(10mMTris-HCl,150mMNaCl,and10mMEDTA)至于室温下约5分钟。接着，加入500ul酚－氯仿，于室温下离心1500rpm15分钟，倒掉上清液，然后以绝对(100%)酒精将DNA沉淀真空抽干后溶于无菌水中[2]。

2 Nest-PCR

为了确保萃取足够的DNA样本，实验中将β-globin 172bp片段扩大当作internalcontrol。β-globin primer是：5’-ACACAACTGTGTTCACTACC-3’及5’-TCTATTGGTCTGGTTAAA CC-3’[3]。接着，将确定萃取足够DNA的每个DNA样本置入含有10mMTris-HCl(PH=8.3),1.5mMMgCl2,10µggelatin,250µMdNTP,1.2 5UTaqDNApolymerase(Promega)及30pmoleprimers的50µl reactionmixture中。PCR的条件为：首先以95C持续3分钟以使双股DNA分开，接着设立条件在94C，15秒，42C，2分钟，72C，20秒，72C，7分钟，35个循环。此步骤共重复3次，直到这些样本无法再被扩大(amplified)为止。所有的PCR产物以3%的agarosegel进行电泳后，将gel予ethidiumbromide染色后在ultra-violettranslluminator下分析结果。为预防样本被污染或有PCR残留物，实验前需将实验用具予以灭菌及避免重复使用旧吸管。此外，每次进行PCR时都应包含有positivecontrol及negativecontrol。

3 结 果

皮细胞，以侦测有无人类乳突状病毒感染的个案后，共有137位子宫颈抹片检查结果为≥CIN1的潜在性阳性个案参与此部分的研究。137位潜在性阳性个案中有43位未接受切片追踪，有94位个案接受切片追踪。接受切片追踪的94位个案平均年龄(±SD)为46.2(±13.2)岁，未接受切片追踪的43位个案平均年龄(±SD)为43.6(±10.8)岁，二组间的平均年龄并无统计上的差异。……