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HPLC法测定清热颗粒中芦丁的含量

2017-03-31张丽云张建云

中国民族民间医药·下半月 2017年3期
关键词:含量测定芦丁

张丽云 张建云

【摘要】目的:研究清热颗粒中芦丁含量和测定方法。方法:采用 HPLC 法分别对6个批次的样品中芦丁含量进行测定。色谱法条件为ZORBAX SB-C18柱(200mm×46mm,5μm),以甲醇-05%磷酸溶液为流动相进行梯度洗脱,检测波长为 358nm,柱温为 30℃。结果:芦丁进样量在0206~206μg范围内与峰面积呈线性关系,平均回收率为9986%,r =09994,RSD为117%(n=6)。结论:HPLC法简便、可靠、准确,可用于清热颗粒的质量控制。

【关键词】清热颗粒; 芦丁; 含量测定

【中图分类号】R284【文献标志码】 A【文章编号】1007-8517(2017)06-0029-02

清热颗粒为广西柳州市中医院院内制剂(批准文号为桂药制字Z02060094),由桑叶、野菊花、紫花地丁、九里明、蒲公英、岗梅根六味药组方,具有清热解毒、抗菌消炎、清肝明目、疏风散热的功效,用于感冒发热、目赤头痛、上呼吸道感染,咽喉肿痛及各种疥疮,临床疗效显著。桑叶为桑科植物桑Morus alba L的干燥叶,具有疏散风热、清肺润燥、清肝明目的功效,用于风热感冒、肺热燥咳、头晕头痛、目赤昏花[1]。其含有黄酮类、生物碱类、苯丙素类、有机酸类、甾体及三萜类等多种化合物[2]。桑叶为方中君药,芦丁是其主要化学成分。为了更好的控制制剂的质量,保证其疗效,研究用高效液相色谱法测定清热颗粒中芦丁的含量。

1仪器与材料

11仪器Agilent 1260型高效液相色谱仪(美国安捷伦公司);XS205Du分析天平(梅特勒-托利多仪器有限公司);HH-S恒温水浴锅(江苏金坛医疗仪器厂);RE-52AA旋转蒸发仪(上海亚荣生化仪器厂)。

12材料芦丁对照品(批号:100080-201408,含量902%,中国药品生物制品检定所);清热颗粒(批号:20160725、20160801、20160912、20161025、20161125、20161201,本院自制);甲醇(色谱纯,赛默飞世尔科技有限公司);磷酸(分析纯,广州化学试剂厂)。

2方法

21溶液的配制

211对照品溶液的配制精密称定芦丁对照品2575mg于25mL容量瓶中,加甲醇溶解制成103 mg/mL的溶液,摇匀,精密量取1mL,移至10mL的容量瓶中,加甲醇溶解制成濃度为0103mg/mL的对照品溶液,即得。

212供试品溶液的配制取10袋清热颗粒内容物,研细,混匀取约2g,精密称定,置圆底烧瓶中,加甲醇50mL,加热回流30min,滤过,滤渣再用甲醇50mL,同法提取2次,合并滤液。减压回收溶剂,残渣用甲醇溶解,转移至25mL量瓶中,并稀释至刻度,摇匀,过045μm滤膜,取续滤液,即得。

213阴性对照品溶液的制备以相同的处方比例取除桑叶外的药材,按供试品溶液的制备方法制备阴性对照品溶液。

22色谱条件色谱柱:ZORBAX SB-C18柱(200mm×46mm,5μm);流动相:以甲醇为流动相A,以05%的磷酸溶液为流动相B,按表1进行梯度洗脱;流速:1mL/min;检测波长:358nm;柱温:30℃。

23方法学考察

231线性关系取0103mg/mL芦丁对照品溶液分别进样 2、5、75、10、125、20μL测定峰面积。以峰面积为纵坐标,质量为横坐标绘制标准曲线,得芦丁回归方程:Y=20E+9X-13E+5,r=09994。结果芦丁在0206~206μg范围内线性关系良好。

24样品测定精密称取6个批号的样品各适量,按供试品制备方法制备样品溶液,在色谱条件下测定,用外标法计算芦丁的含量。结果批号为20160725、20160801、20160912、20161025、20161125、20161201的样品中芦丁的含量分别为0130mg/袋,0152mg/袋,0175mg/袋,0128mg/袋,0142mg/袋,0126mg/袋,平均为0142mg/袋。

3讨论

将芦丁对照品的甲醇溶液在200nm~600nm 的范围内进行扫描,芦丁在215nm、258nm、358nm 处出现 3 个吸收峰,考虑到在短波长位置,处方中其它的组分干扰太大,结合文献报道[1,3-4],选择358nm作为检测波长。

研究还对含量测定中流动相的条件进行了考察,曾采用甲醇-水(40∶60),甲醇-1%冰醋酸溶液(35∶65)及 甲醇-05%磷酸溶液(35∶65)作为测定条件,但峰出现拖尾。选用流动相为甲醇-05%磷酸溶液进行梯度洗脱[1],分离效果好,分离度大于15,理论塔板数大于3000,且阴性无干扰,故选择本系统为流动相。

在提取溶剂的选择上,采用甲醇、乙醇、水作为提取溶剂,通过比较单一溶剂和混合溶剂,最后选定甲醇溶液作为最佳提取溶剂。考察了加热回流提取时间的影响,结果发现加热回流处理20、30、40min 差别不大,为了提取完全同时又节约时间,故选择加热回流提取30min为宜。

综上,采用HPLC法测定清热颗粒中芦丁的含量,该方法简便、可靠、准确,可用于清热颗粒的质量控制。

参考文献

[1]国家药典委员会. 中华人民共和国药典(一部)[M]. 北京:中国医药科技出版社,2015:297.

[2]王晓静,王元书,邱进,等.桑叶化学成分研究 [J].食品与药品,2007 (1) :9.

[3]曾森,刘虹,张德芹,等.对市售桑叶药材中芦丁的含量调查[J].中医药导报,2010,16(4):77-78.

[4]郭玉,唐国涛,陈淑娴,等.槐花米中芦丁提取方法的比较研究[J].中成药,2007,29(11):1675-1677.

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