邢涛　郁星星　张峻　周光胜　张红飞　朱爱军

摘要：采集闵行地区规模猪场疑似PRRS阳性病料，在Marc-145细胞上进行病毒分离，采用RT-PCR扩增PRRSV高度保守的N基因并测序。结果表明，成功分离到6株PRRSV，为研究闵行地区PRRSV流行株分子变异和致病机理提供了良好的生物素材。

关键词：猪繁殖与呼吸综合征病毒；N基因；分离与鉴定；序列分析

中图分类号：S828 文献标识码：A 文章编号：0439-8114（2017）04-0704-03

猪繁殖与呼吸综合征（PRRS）又称猪蓝耳病，是由猪繁殖与呼吸综合征病毒（PRRSV）引起的猪的烈性传染病，是全球养猪行业最重要的疾病[1，2]。研究表明，ORF7编码的核衣壳N蛋白在同型的不同毒株中最为保守，是PRRSV免疫原性最强的结构蛋白[3，4]，Lee等[5]研究表明N蛋白的核定位与病毒的持续感染或选择变异具有一定相关性，在病毒的免疫逃避中扮演着重要角色，因此，N蛋白以其高度的保守性和强大的免疫原性成为诊断PRRS的首选蛋白。本研究克隆并测序其相对保守的N基因，通过序列分析软件与国内外参考毒株进行推导氨基酸序列比较以及同源比对分析，探讨闵行地区PRRSV优势流行毒株的类型，以期为科学预防PRRS提供参考依据。

1 材料与方法

1.1 材料

1.1.1 病料 试验样品为2015年采集闵行地区正义牧场（疫苗株Ingelvac PRRS MLV）、中南牧场（疫苗株TJM-F92）两个规模猪场发生高热、咳喘、繁殖障碍等猪繁殖与呼吸综合征疑似病猪的肺脏、脾、扁桃体。

1.1.2 主要试剂 DMEM培养基为Gibeo公司产品；Trizol、dNTPs、pMD18-T、限制性内切酶、DNA Marker均为宝生物工程（大连）有限公司产品；胶回收试剂盒为Fermentas公司产品；M-MLV Reverse Transcriptase为Promega公司产品。……