退火温度、DNA聚合酶和扩增仪对水稻品种真实性SSR分子检测质量的影响
2017-03-21于晓岳杨华邹芳刚
于晓岳+杨华+邹芳刚


摘要:SSR标记法已经被广泛应用到水稻品种真实性的鉴定中,此方法具有快速、稳定等特点。本研究对比了不同退火温度、DNA聚合酶以及PCR扩增仪等因素对水稻品种真实性SSR分子检测方法的影响,旨在探讨如何根据实验室自身情况选择适合的反应体系和反应条件来顺利地开展检测工作。结果表明,55 ℃退火温度的PCR产物较有利于水稻品种真实性SSR标记的检测;2种PCR仪性能比较一致,均适合水稻品种真实性SSR标记的检测;TaKaRa及生工Taq DNA聚合酶均适合水稻品种真实性SSR标记的检测,天根Taq DNA聚合酶不适合水稻品种真实性SSR标记的检测。不同实验室,应选择以上3个适合实验条件进行组合,以提高水稻品种真实性和纯度分子检测的准确性。
关键词:水稻;SSR;品种真实性检测;退火温度;PCR扩增仪;DNA聚合酶
中图分类号: S511.01 文献标志码: A
文章编号:1002-1302(2016)11-0057-03
SSR称为简单重复序列(simple sequence repeat),也可以称为微卫星DNA(microsatellite DNA)。SSR是由1~6个核苷酸为重复序列组成的串联重复序列,这些简单重复序列随机、均匀,并且广泛存在于真核生物的基因组上[1] 。分子标记(molecular markers)是以个体间遗传物质内核苷酸序列变异为基础的遗传标记,是DNA水平遗传多态性的直接反映。以这种简单重复序列为基础的标记技术被称为分子标记技术,SSR分子标记由Moore等于1991年创立[2]。由于SSR分子标记具有非组织和发育阶段特异性、不易受外界环境影响、多态性高、在基因组中分布广泛、呈共显性遗传等优点,目前已经被广泛应用在农作物品种的真实性鉴定和纯度鉴定中[3-6]。……
