郑惠文 逄宇 赵雁林

·论著·

结核分枝杆菌在不同pH值液体培养基中对吡嗪酰胺敏感度的研究

郑惠文 逄宇 赵雁林

目的 研究结核分枝杆菌在不同pH值液体培养基中对吡嗪酰胺(PZA)敏感度的影响，同时比较不同pH值下结核分枝杆菌对吡嗪酰胺的敏感度与测序结果的一致率，探讨最适合对吡嗪酰胺进行药物敏感性试验(简称“药敏试验”)的pH值。方法 本研究采用简单随机抽样法中的直接抽选法，从2007年全国结核病耐药性基线调查的3929株结核分枝杆菌菌株中抽取348株；采用BACTEC MGIT 960系统在液体培养基pH值为 5.3、5.5、5.7、5.9和6.1时，分别检测结核分枝杆菌对吡嗪酰胺的敏感度；同时对吡嗪酰胺耐药的结核分枝杆菌相关基因pncA和rpsA进行测序，分析其突变特征；采用卡方检验统计2种方法检测吡嗪酰胺耐药率的差别，以P<0.05为差异有统计学意义。结果 在348株结核分枝杆菌中，用MGITTM960 PZA试剂盒(pH值为5.9)检测的吡嗪酰胺总耐药率为14.4% (50/348)，DNA测序结果有43株耐药，其中有30(69.8%)株检测到吡嗪酰胺药物耐药相关基因pncA发生突变， 1株(2.3%)耐药分离株仅在rpsA有突变。在液体培养基pH值为6.1、5.9、5.7、5.5 和5.3时，DNA测序结果与所有菌株表型药敏试验结果的一致率分别为94.8% (330/348)、95.1% (331/348)、 96.8% (337/348)、 95.2% (316/332) 和 93.5% (287/307)。并且pH值为5.7时2种方法的耐药一致率(92.1%，35/38)明显高于pH值为5.9(76.0%， 38/50)时(χ2=3.961,P=0.047)；而pH值为6.1 (72.7%，40/55)、pH值为5.5(93.3%，28/30)和pH值为5.3(95.0%， 19/20)时的耐药一致率与pH值为5.9时的耐药一致率相比，差异无统计学意义(χ2=0.147,P=0.702；χ2=0.366,P=0.545；χ2=3.410,P=0.065)。结论 液体培养基pH值为5.7时，结核分枝杆菌对吡嗪酰胺耐药与遗传突变检测结果有较好的相关性。

分枝杆菌，结核； 吡嗪酰胺； 培养基, 条件性； DNA突变分析； 抗药性； 判别分析

结核病是全世界重要的公共卫生问题之一。据WHO估计，2015年全球约有104万例新发结核病患者，140万例死于结核病，中国的新发结核病患者例数仅次于印度和印度尼西亚而位居全球第三位[1]。吡嗪酰胺(PZA)是重要的一线抗结核药物，可在酸性环境中杀死半休眠状态的结核分枝杆菌，使化疗疗程从既往的9～12个月缩短至6个月[2]。在酸性环境中(pH=5.5)，PZA能够转化为吡嗪酸(pyrozinoic acid，POA)，发挥杀菌活性[3]。WHO 推荐采用BACTEC MGIT 960系统(简称“MGIT 960系统”)在酸性环境中(pH=5.9)检测结核分枝杆菌对PZA的敏感度[4]，但不同的pH值将影响吡嗪酰胺酶(pyrazanamidase, PZase)的活性，从而可能对结核分枝杆菌产生不同的抑制作用。……