康强，邹浩，刘立鑫，王连敏，赵松凌，张小文

(昆明医科大学第二附属医院，昆明650101)

沉默葡萄糖调节蛋白75对人肝癌细胞HCCLM3增殖和凋亡的影响

康强，邹浩，刘立鑫，王连敏，赵松凌，张小文

(昆明医科大学第二附属医院，昆明650101)

目的 探讨沉默葡萄糖调节蛋白75(GRP75)表达对人肝癌细胞HCCLM3增殖和凋亡的影响。方法 体外培养人肝癌细胞HCCLM3，随机分为对照组、siRNA-1组、siRNA-2组，采用脂质体转染法将siRNA导入siRNA-1组(上游序列5′-GAGACGGUUUCCAAAUGAATT-3′，下游序列5′-UUCAUUUGGAAACCGUCUCTT-3′)、siRNA-2组(上游序列5′-GCUCUAAGGCUUCCAACCUTT-3′，下游序列5′-AGGUUGGAAGCCUUAGAGCTT-3′)，对照组不予干扰序列。采用Western blotting法检测各组GRP75表达，采用CCK-8法检测各组转染2、24、48、96 h细胞增殖情况，采用流式细胞术检测各组细胞凋亡情况。结果 与对照组比较，siRNA-1组、siRNA-2组GRP75表达明显降低(P均<0.01)，以siRNA-2组降低更明显(P<0.05)。与对照组比较，siRNA-1组、siRNA-2组各时点细胞增殖能力均降低(P均<0.01)，且以siRNA-2组降低更明显(P<0.01)；与对照组比较，siRNA-1组、siRNA-2组细胞凋亡率均明显升高(P均<0.01)，且siRNA-2组升高更明显(P<0.01)。结论 沉默GRP75表达可抑制人肝癌细胞HCCLM3增殖活性，并促进其凋亡。

肝癌；葡萄糖调节蛋白75 ；细胞增殖；细胞凋亡

肝细胞癌(HCC)恶性程度高，患者预后差，5年生存率不足9%，即使是接受肝移植患者5年生存率也只有30%左右[1～3]。葡萄糖调节蛋白75(GRP75)属于热休克蛋白70家族成员之一，参与线粒体生成、细胞内运输、细胞增殖及信号传导等生物学过程[4～6]。研究证实，GRP75在正常组织中低表达或不表达，而在多种肿瘤中表达上调[7,8]。与其他肝癌细胞株比较，肝癌HCCLM3细胞株恶性程度更高。前期研究发现，肝癌细胞HCCLM3中GRP75表达明显上调，并与肿瘤的恶性程度密切相关。2015年7～12月，我们通过脂质体转染法沉默人肝癌细胞HCCLM3 GRP75表达，并观察其对人肝癌细胞HCCLM3增殖及凋亡的影响。现分析结果并报告如下。

1 材料与方法

1.1 材料 人肝癌细胞株HCCLM3，复旦大学附属中山医院肝癌研究所馈赠。PBS、TBST、RIPA裂解液、PVDF膜、PMSF及不含EDTA的胰酶消化液购自江苏凯基生物技术股份有限公司。……