周丹，刘雪茹，李涛，刘力，谭晓秋，刘玉林

(1西南医科大学附属医院，四川泸州646000；2西南医科大学心血管医学研究所)

小G蛋白Rab5对表达在HEK293细胞上的大电导钙激活钾通道的影响

周丹1，刘雪茹1，李涛2，刘力1，谭晓秋2，刘玉林1

(1西南医科大学附属医院，四川泸州646000；2西南医科大学心血管医学研究所)

目的 探讨小G蛋白Rab5对HEK293细胞大电导钙激活钾通道(BKCa)的影响。方法 将对数生长期HEK293细胞，随机分为Control组、Rab5WT组、Rab5CA组和Rab5DN组。采用脂质体转染法进行转染，Control组转染Flag-hSlo1-GFP质粒和对照质粒pcDNA3.1，Rab5WT组转染Flag-hSlo1-GFP质粒和Rab5WT质粒，Rab5CA组转染Flag-hSlo1-GFP质粒和Rab5CA质粒，Rab5DN组转染Flag-hSlo1-GFP质粒和Rab5DN质粒，每组两种质粒总量为4 μg，按质量比1∶1共转染至3.5 mm培养皿中。转染72 h、荧光显微镜下观察转染效率在70%以上时，采用膜片钳、Western blotting法和流式细胞术观察Rab5对HEK293细胞BKCa的作用。结果 与Control组比较，Rab5WT组、Rab5CA组BKCa全细胞电流密度明显增加，而Rab5DN组明显降低；Rab5WT组、Rab5CA组BKCa膜蛋白的相对表达量明显升高，而Rab5DN组明显降低(P均<0.05)；Rab5WT组、Rab5CA组Flag+/GFP+明显增加，而Rab5DN组明显降低(P均<0.05)。结论 Rab5能够明显增加表达在HEK293细胞上的BKCa电流及细胞膜上的表达，并可促进BKCa向质膜的转运过程。

小G蛋白家族；大电导钙激活钾通道；蛋白转运；基因转染

大电导钙激活钾通道(BKCa)是血管平滑肌细胞膜上重要的离子通道， 可携带70%～80%的外向

电流，在调节血管张力和血压中发挥重要作用[1]。我们前期研究发现， BKCa是众多舒血管药物的作用靶点，其功能活动异常与高血压等密切相关[2,3]。BKCa蛋白在内质网合成、高尔基体加工后，需经过一系列复杂机制组装并转运到质膜上，才能发挥生理功能；因此，细胞膜上BKCa蛋白的表达水平及调控对其功能的发挥至关重要。小G蛋白家族成员Rab在质膜内侧及多种胞内囊泡结构中存在，具有调节囊泡转运和离子通道活动等功能。……