陶永佳， 李 根， 薛永常

(大连工业大学 生物工程学院，辽宁 大连 116034)

脂肪酸代谢途径是生物体内主要的代谢途径[1]，其产物主要被利用作为细胞膜的合成，而一些产物用作群体感应和蛋白转录后修饰[2]。酰基载体蛋白(Acyl carrier protein，ACP)作为脂肪酸合酶(Fatty acid synthases，FAS)的中心组件，能够结合脂肪酸代谢途径中各种脂肪酰基中间体，是不可或缺的辅因子[3-6]。ACP是一个小的、含量丰富、高度保守的载体蛋白，其三级结构由三个平行的α螺旋和一个短的横向的α螺旋组成[7-8]，这四个α螺旋束形成一个疏水性的腔，并具有高度的结构适应性，能够容纳不同长度的酰基链，结合酰基中间体，在各种酶的活性位点之间传递[9-11]。ACP结构和功能已经引起广泛的关注，近几年，主要对其三级结构以及功能多样性分析。本实验室前期从海洋浅海淤泥及岩石附着藻类上筛选得到1株高产油脂菌，经鉴定为海洋季也蒙毕赤酵母，本研究通过对该酵母的ACP基因的克隆，利用生物信息学网站和软件对其拟表达蛋白的理化性质、结构进行预测分析，对酰基载体蛋白的功能深入研究具有重要意义。

1 材料与方法

1.1 材料

1.1.1 菌种来源 海洋季也蒙毕赤酵母(Meyerozymaguilliermondii)T-1，本实验室筛选保藏；大肠埃希菌E.coliDH5α，本实验室保藏。

1.1.2 培养基 酵母为YPD培养基，陈海水配置；大肠埃希菌为LB培养基。

1.1.3 试剂盒 Ezup柱式酵母基因组DNA抽提试剂盒，UNIQ-10 柱式微量琼脂糖凝胶DNA回收试剂盒，生工生物工程(上海)股份有限公司；T-Vector pMDTM19试剂盒，宝生物工程(大连)有限公司；质粒小提试剂盒，天根生化科技(北京)有限公司。……