张琳+顾炜+朴美淑+吴景东

摘 要 目的：观察痤疮合剂对痤疮的疗效，并初步探求其治疗痤疮的作用机制。方法：家兔耳廓部造模成功后，将家兔分为6组进行治疗。通过观察局部外观变化并检测血清中IL-8、TNF-α含量证实痤疮合剂对痤疮动物的炎症抑制作用。结果：与正常对照组比较，其余5组IL-8、TNF-α含量均显著升高；与模型对照组比较，痤疮合剂低、中、高剂量组及药物对照组炎症因子含量均显著下调，且高剂量组含量的下调更为显著（P<0.01）。结论：痤疮合剂治疗痤疮呈量效依赖关系，其作用机制可能与抑制血清中相关炎症因子水平有关。

关键词 痤疮合剂 白介素-8 肿瘤坏死因子-α

中图分类号：R286； R285.5 文献标识码：A 文章编号：1006-1533（2017）03-0065-04

ZHANG Lin1**， GU Wei2， PIAO Meishu3， WU Jingdong4***

（1. 93279 Forles Political Office， Dandong 118000， China； 2. the Hospital affiliated to Liaoning University of Traditional Chinese Medicine， Shenyang 110032， China； 3. Korean Wonkwang University， Seoul， Korea； 4. Liaoning University of Traditional Chinese Medicine， Shenyang 110847， China）

ABSTRACT Objective： To observe the effect of acne mixture on acne and preliminarily explore its mechanism in the treatment of acne. Methods： The rabbits were divided into 6 groups to be treated after the modeling succeeded. The inhibition of acne mixture to the inflammation of experimental animals was verified by the observation of the changes of local appearance and the determination of IL-8 and TNF-α levels in serums. Results： Compared with normal control group， the IL-8 and TNF-α levels five groups were significantly higher in the other 5 groups than in the control group （P<0.01） and the levels of inflammatory factors were significantly down-regulated in the groups with low， medium and high dose of acne mixture compared with the model group （P<0.01）， and furthermore their down-regulation was more significant in the high dose group than in the low and medium groups. Conclusion： The efficacy of acne mixture for the treatment of acne presents dose-dependent relationship and its mechanism of action may be related to the inhibition of the levels of inflammatory factors in serum.

KEy WORDS acne mixture； IL-8； TNF-α

痤瘡（acne）是临床常见的慢性炎症性皮肤疾病，在中青年人群中发病率高，严重影响患者自信心。辽宁中医药大学附属医院针对青年人痤疮的发病特点，以清肺胃湿热、解毒散结为治疗原则，研制了痤疮合剂，临床应用效果较好。因目前对痤疮合剂作用机制的研究较少，本研究拟通过实验观察低、中、高剂量痤疮合剂对痤疮的疗效，并尝试探讨其抗炎作用的机制，为临床推广应用提供有力的实验依据。

1 材料和方法

1.1 实验药品及制备

痤疮合剂（辽宁中医药大学附属医院院内制剂）；清热暗疮胶囊（批号：Z20070425）；痤疮合剂的方药组成有：夏枯草、枇杷叶、地黄、牡丹皮、黄连、桑白皮、连翘、金银花、黄芩、牛蒡子、川芎、防风、牡蛎、蝉蜕、北沙参、葛根、香附；煤焦油（美国MG217，批号：81511）；IL-8试剂盒（武汉云克隆，批号：SEA080Rb）；TNF-α试剂盒（武汉云克隆，批号：SEA133Rb）。

1.2 主要仪器设备

酶标仪（奥地利安图，anthos 2010型）；离心机（中国翔宇，PB300）。

1.3 实验动物

健康家兔48只，雄性，体重2.5～3 kg，由辽宁中医药大学实验动物中心提供。家兔购买后于辽宁中医药大学实验动物中心饲养1周，以适应环境，饲以白菜、胡萝卜，自由饮食、饮水，单笼饲养，以防止互相撕咬导致兔耳损伤。48只家兔随机分成6组，每组8只，分别为 ①空白对照组；②模型对照组；③痤疮合剂低剂量组；④痤疮合剂中剂量组；⑤痤疮合剂高剂量组；⑥药物对照组（清热暗疮胶囊组）。

1.3.1 造模

除空白对照组外，其余各组家兔按照Kligman法造模[1]，用玻璃棒在兔双耳内侧面耳管开口处涂煤焦油，每日1次，每次约0.5 ml，造模持续2周。第15天取耳部痤疮病变皮肤活检，确定造模成功后，进行后续实验。

1.3.2 干预方法

空白对照组不予处理，模型对照组每日给予20 ml生理盐水，低、中、高剂量组每日灌胃痤疮合剂20 ml，低剂量组按等效剂量的3倍剂量给药，中剂量组按等效剂量的6倍剂量给药，高剂量组按等效剂量的9倍剂量给药。低、中、高剂量药物按每天用药量不同分别煎煮成20 ml水煎液，每日灌胃1次。清热暗疮胶囊临床成人用量为2.4 g/d，分2次服用，经等效剂量换算后，兔用药量为0.12 g/（kg·d），溶于20 ml生理盐水后，每日灌胃1次，各组均连续治疗2周。

1.3.3 采集血清

麻醉后，耳缘静脉取血，分装于离心管中，静置30 min，1 000 r/min离心5 min，取上清，分装于离心管中，采用酶联免疫吸附（ELISA）法检测各组家兔血清中IL-8、TNF-α的含量。

1.4 血清中IL-8、TNF-α含量测定

将用于家兔血清IL-8、TNF-α含量检测的ELISA试剂盒从4 ℃冰箱中取出，室温静置30 min，实验步骤严格按照试剂盒说明书进行。

1.5 统计学分析

2 實验结果

2.1 兔耳痤疮模型外观变化

正常对照组兔耳廓呈淡红色，厚度适中，其上毛细血管清晰可见，未见角栓及毛囊结节；模型对照组造模成功2周后兔耳部红肿，表皮明显增厚，可见明显毛囊角栓，毛囊口呈突起，有多处结节；痤疮合剂低剂量组兔耳表皮增厚，毛囊角栓和结节与模型对照组相比明显减少，但仍有较多未治愈粉刺存在；痤疮合剂中剂量组兔耳表皮厚度已基本正常，毛囊角栓和结节只有少量存在，部分角栓脱落后遗留点状凹陷的毛囊；痤疮合剂高剂量组和药物对照组皮损恢复状态与痤疮合剂中剂量组相近（图1）。

2.2 治疗后家兔血清IL-8、TNF-α含量检测结果

与正常对照组比较，其余5组IL-8、TNF-α含量均显著升高，差异有统计学意义（P<0.01，表1）；与模型对照组比较，痤疮合剂低、中、高剂量组及药物对照组含量均显著下调，差异有统计学意义（P<0.01，表1）；低、中、高剂量各组间对照，差异有统计学意义（P<0.01，P<0.05，表1）；与中剂量组比较，高剂量组IL-8、TNF-α含量显著下调，差异有极显著意义（P<0.01，P<0.05，表1），而药物对照组TNF-α含量差异无统计学意义（P>0.05，表1）。

3 讨论

本研究在中医整体观念及辨证论治的指导下，对痤疮模型采用的痤疮合剂方，发挥了良好的治疗效果[2]。

方中金银花、连翘清热解毒，芳香透邪，消痈散结，为治热毒疮痈要药[3]。黄芩清肺热，黄连泻胃火，二药相伍，可以清泻肺胃火毒[4]。桑白皮、枇杷叶泻肺胃之热且降逆气、俾火；沙参清热并能养阴，以防邪热伤阴；夏枯草清热散结，牡蛎软坚散结[5]，合用以助疖肿消散；牛蒡子疏散热毒[6]，散结消肿，防风辛散透表[7]，蝉蜕宣散透邪[8]，葛根解肌散邪[9]，四药合用，促使热毒邪气从肌表而散；地黄凉血清热，牡丹皮凉血散瘀，川芎活血行气，香附行气止痛[10]，血畅气行，则郁热火毒易解。诸药合用，共奏清肺胃湿热，解毒散结之功。

本研究从兔耳外观表现观察，并结合IL-8、TNF-α含量检测结果分析，可以证实痤疮合剂对兔耳痤疮模型确有疗效，结果显示痤疮合剂高剂量组的治疗效果最好，IL-8、TNF-α含量下降最明显，要优于中、低剂量组和药物对照组，但是TNF-α含量下降的程度在高剂量组和药物对照组中相比相差甚微，与中低剂量组相比，IL-8、TNF-α含量在清热暗疮胶囊药物对照组的下降程度更低。

本研究同时初步探讨了痤疮合剂起效的作用机制，现代研究发现炎症是痤疮发病的重要因素之一，参与痤疮炎症反应的主要有IL-1α、IL-4、IL-8及TNF-α等细胞因子[11]。我们曾经将IL-1α、IL-6在痤疮合剂高中低剂量组和药物对照组中含量下降做过对比，结果发现虽然与本研究检测的细胞因子不同，但是统计分析结果同样是痤疮合剂高剂量组疗效最好[12]。有研究通过检测痤疮患者治疗前后的细胞因子IL-1、IL-6、IL-8，发现炎症介质的表达水平明显不一样，表明痤疮的发生与这几种炎性细胞因子有关，进一步证实了其在痤疮发病机制中的重要作用[13]。IL-8通过受体IL8-RA和IL8-RB产生多种生物学功能，包括促炎性细胞趋化、促血管生成、促有丝分裂和诱导细胞增殖等[14]。TNF-α是通过激活炎性细胞使其产生一系列的炎性介质，进而引起痤疮的发病。本研究结果发现痤疮合剂显著降低血清IL-8、TNF-α的水平，具有良好的抗炎作用，可为今后临床应用提供实验依据，但目前研究还停留在初级阶段，下一步将对其炎症受体及相关信号通路进行深入研究。

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