余 舰， 张 扬， 晁迎九， 高 歌， 陈 昱， 顾大群

(安徽省立医院神经外科，安徽省脑立体定向神经外科研究所，安徽 合肥 230036)

miRNA-21减轻氧糖剥夺对PC12细胞的损伤*

余 舰△， 张 扬， 晁迎九， 高 歌， 陈 昱， 顾大群

(安徽省立医院神经外科，安徽省脑立体定向神经外科研究所，安徽 合肥 230036)

目的： 探讨微小RNA(miRNA)-21对低氧缺血损伤PC12细胞的影响。 方法：体外培养PC12细胞，建立氧糖剥夺(OGD)损伤模型。细胞随机分为对照组、OGD组、阴性对照序列+OGD组、miRNA-21 inhibitor+ OGD组和miRNA-21 mimic+OGD组。通过采用CCK-8、real-time PCR、Western blot等技术探讨miRNA-21对OGD损伤PC12细胞的影响和机制。 结果：降低miRNA-21的表达，受OGD损伤的PC12细胞活力明显下降；增加miRNA-21的表达，受OGD损伤的PC12细胞活力明显增加。进一步发现miRNA-21促进OGD损伤PC12细胞的AKT磷酸化。 结论:miRNA-21明显增加OGD损伤PC12细胞的活力，其机制可能与激活PI3K/AKT信号通路有关。

微小RNA-21； PI3K/AKT信号通路； 氧糖剥夺； PC12细胞

脑血管疾病一直是危害我国中老年人身体健康和生命安全的主要疾病，其中以缺血性卒中最为常见，发病比例约70%，在缺血性卒中的病理生理学过程中，低氧缺血是造成脑组织损伤的主要因素。已知微小RNA(microRNA，miRNA)是一类长度为20～24个核苷酸的内源性非编码小RNA，在转录水平负性调控基因的表达[1]。而前期研究对缺血缺氧后大鼠大脑切片行miRNA基因芯片分析的结果提示缺血缺氧处理后miRNA-21表达量显著上调[2]。本研究借助氧糖剥夺(oxygen-glucose deprivation，OGD)造成的低氧缺糖损伤细胞模型，探讨miRNA-21对受血损伤的PC12细胞的保护作用。

材 料 和 方 法

1 材料

PC12细胞购自上海细胞库；DMEM和胎牛血清(Gibco)；LipofectamineTM2000及TRIzol(Invitrogen)；SYBR Green Master Mix(TaKaRa)；CCK-8试剂盒(Dojindo)；抗p-AKT (Ser-473)、p-AKT (Thr-308) 多克隆抗体和AKT抗体(Cell Signaling Technology)；抗β-actin抗体(Sigma)。

2 方法

2.1 细胞培养及分组 PC12细胞置于高糖DMEM(含10%胎牛血清、10 mmol/L HEPES和2 mmol/L谷氨酸)，37 ℃、5% CO2状态下培养。……