王士猛

(山东省菏泽市立医院胸外科，山东 菏泽 274000)

下调TCF3抑制非小细胞肺癌细胞的增殖和迁移能力

王士猛△

(山东省菏泽市立医院胸外科，山东 菏泽 274000)

目的： 探索下调T细胞因子3(TCF3)抑制非小细胞肺癌细胞增殖和迁移的分子机制。方法: 运用Lipofectamine 2000转染法将siTCF3和阴性对照siRNA(NCsiRNA)转染非小细胞肺癌A549和H1299细胞；运用real-time PCR和Western blot分别测定TCF3的mRNA和蛋白水平；运用萤光素酶报告基因实验测定TCF3的转录活性；MTT、克隆形成实验、Transwell实验和Annexin V-FITC/PI染色联合流式细胞术分别测定细胞的活力、克隆形成能力、转移能力及细胞凋亡率；Western blot检测Wnt、c-Myc、基质金属蛋白酶(MMP)-9、MMP-13、金属蛋白酶组织抑制物(TIMP)-1的蛋白表达水平。结果: 与NCsiRNA转染组的细胞比较，siTCF3显著抑制A549细胞和H1299细胞中TCF3的mRNA 和蛋白水平 (P<0.01)。TCF3转录活性和c-Myc蛋白表达水平明显低于NCsiRNA细胞(P<0.05)。MTT实验结果显示，培养24 h、48 h、72 h和96 h的A549-siTCF3和H1299-siTCF3细胞活力均显著低于NCsiRNA细胞(P<0.05)。与NCsiRNA细胞相比，siTCF3显著抑制A549细胞 和H1299细胞的克隆形成能力(P<0.01)。Transwell实验结果显示A549-siTCF3和H1299-siTCF3细胞迁移数显著低于A549-NCsiRNA和H1299-NCsiRNA组细胞(P<0.05)。流式细胞术分析结果显示A549-siTCF3细胞和H1299-siTCF3细胞的凋亡率显著高于A549-NCsiRNA和H1299-NCsiRNA细胞(P<0.01)。Western blot实验结果显示，下调TCF3表达能抑制Wnt蛋白的表达，MMP-9和MMP-13的蛋白表达明显降低，TIMP-1的蛋白表达增高。结论: siTCF3显著抑制A549细胞和H1299细胞的增殖和迁移能力，并诱导细胞凋亡，其分子机制可能通过下调Wnt通路活性以及调控MMP家族关键成员的表达而实现。

非小细胞肺癌； T细胞因子3； 基质金属蛋白酶

肺癌已成为严重威胁人类健康与生命最常见的恶性肿瘤之一，其发病率和死亡率位居所有癌症之首[1]。非小细胞肺癌(non-small cell lung cancer，NSCLC)是肺癌的主要类型，约占肺癌的80%～85%[2]。目前放疗是NSCLC的主要治疗方案，但NSCLC对放疗产生耐受是导致预后不良和五年生存率低的主要原因[3]。因此，寻找和研发治疗NSCLC的小分子靶向药物是亟需解决的问题，已成为治疗肺癌的重要课题。

T细胞因子3(T-cell factor 3，TCF3)是经典Wnt信号通路的效应分子之一。早期的研究发现TCF3基因缺失导致早期胚胎发育致死，表现为神经和中胚层发育缺陷[4]。TCF3过表达能刺激人皮肤毛囊隆突表皮原始祖细胞分裂并抑制细胞分化。研究发现TCF3与Oct4、Sox2、Nanog基因启动子区域结合,拮抗这些基因的作用进而抑制鼠胚胎干细胞的自我更新[5-6]。……