李姗姗 秦 欢 刘芊伊 徐 林 张继东 冯继红 李龙梅 泮红飞 罗军敏

(遵义医学院免疫学教研室，贵州省免疫分子应用研究工程中心，遵义563099)

TLR2/4在MTB Hsp16.3刺激小鼠巨噬细胞过程中表达及作用的初步探讨①

李姗姗 秦 欢 刘芊伊 徐 林 张继东 冯继红 李龙梅 泮红飞 罗军敏

(遵义医学院免疫学教研室，贵州省免疫分子应用研究工程中心，遵义563099)

目的：在体外细胞水平，初步探讨TLR2/4在MTB Hsp16.3刺激小鼠骨髓来源巨噬细胞的表达及作用。方法：从BALB/c小鼠的胫腓骨中取骨髓细胞，与GM-CSF共培养获得骨髓来源的M0型巨噬细胞，流式检测F4/80和CD11b的表达并观察其形态；100 ng/ml MTB Hsp16.3刺激M0巨噬细胞，分别培养0、12、24、36、48、72 h，Real-time PCR检测不同时间点TLR2/4的表达水平；利用RNAi干扰技术沉默巨噬细胞表面的TLR2/4受体，MTB Hsp16.3刺激沉默TLR2/4的M0巨噬细胞，分别培养0、12、24、36、48、72 h，Real-time PCR检测不同时间点TLR2/4及Ym-1、Fizz1、IL-10 、TNF-α、iNOS、TGF-β细胞因子的表达水平。结果：M0型巨噬细胞在MTB Hsp16.3刺激后出现了较短的伪足，沉默TLR2/4 的M0型巨噬细胞在MTB Hsp16.3刺激后出现了较长伪足；M0巨噬细胞在MTB Hsp16.3刺激后高表达TLR2/4。MTB Hsp16.3刺激沉默TLR2/4 的M0型巨噬细胞，高表达M1型巨噬细胞相关的细胞因子IL-6、TNF-α、iNOS，低表达M2型巨噬细胞相关的细胞因子IL-10、TGF-β、Ym-1、Fizz1。结论：MTB Hsp16.3 通过TLR2/4促进M0型巨噬细胞向M2型转化，抑制M1型巨噬细胞，这可能参与了MTB躲避巨噬细胞的吞噬过程。

结核分枝杆菌；Toll样受体；MTB Hsp16.3；替代性活化巨噬细胞

结核病(Tuberculosis，TB)是由结核分枝杆菌(Mycobacterium tuberculosis，MTB)引起的慢性传染性疾病。MTB是典型的胞内菌，主要寄居于巨噬细胞内与宿主免疫系统相互斗争[1]。当机体感染MTB后，巨噬细胞可发挥免疫调节作用，抑制或杀灭MTB[2]。同时MTB可以通过多种机制来逃逸巨噬细胞的杀伤，如抑制巨噬细胞的凋亡，逃避巨噬细胞的吞噬及避免反应氧和反应氮产物的毒性等[3]。……