毛旭华， 汤俊明， 井昶雯， 曹海霞

论 著

Survivin和SIRT1 mRNA在非小细胞肺癌中的表达及两者相关性分析

毛旭华， 汤俊明， 井昶雯， 曹海霞

目的 检测survivin和SIRT1 mRNA在非小细胞肺癌中的表达，探讨其相互关系。方法 用实时定量PCR的方法检测江苏省肿瘤医院42组非小细胞肺癌组织和对应的癌旁组织中survivin和SIRT1 mRNA的表达，统计survivin与SIRT1的相关性。观察EGFR酪氨酸酶抑制剂吉非替尼处理非小细胞肺癌细胞系HCC827后survivin和SIRT1的表达改变。结果 85.7%(36/42)肿瘤组织survivin mRNA表达明显高于对应的癌旁组织。61.9%(26/42)肿瘤组织SIRT1 mRNA的表达低于其癌旁组织，33.3%(14/42)肿瘤组织SIRT1 mRNA表达高于其癌旁组织。Survivin表达与SIRT1表达有统计学意义的相关性(P<0.05)。吉非替尼能增加HCC827细胞中的SIRT1表达，降低survivin的表达水平，呈时间和剂量依赖性。结论 Survivin在非小细胞肺癌组织中高表达，而大部分SIRT1基因呈低表达状态。survivin与SIRT1表达呈负相关。在细胞水平上，吉非替尼能增加SIRT1的表达从而降低survivin的水平。提示两者在非小细胞肺癌的发生发展中可能发挥重要作用。

非小细胞肺癌； survivin； SIRT1； 实时定量PCR

肺癌是最常见的恶性肿瘤之一，发病率逐年增高，且5年生存率<20%[1]。非小细胞肺癌(non-small cell lung cancer,NSCLC)是最常见的肺癌病理类型。肿瘤的发生发展为多种因素共同作用的复杂生物学过程,与癌基因及抑癌基因的异常密切相关。凋亡抑制基因survivin也被称为含杆状病毒IAP重复序列分子5，参与凋亡抑制、增强细胞增殖能力和促进新生血管形成等生理病理过程[2]。Survivin在多种人类肿瘤中高表达[3]。而沉默信息调节因子1(sirtuin type 1,SIRT1)是沉默信息调节因子2 (silent information regulator 2，Sir2)的哺乳动物同源基因，是依赖于尼克酰胺腺嘌呤二核苷酸的组蛋白去乙酰化酶，属第三类去乙酰化酶。在体内通过对组蛋白及多种非组蛋白的去乙酰化修饰，调节基因表达，参与细胞衰老、凋亡、分化等生理活动[4]。小分子的表皮生长因子受体-酪氨酸激酶抑制剂吉非替尼是临床上常用的肺癌靶向治疗药物。本研究利用实时定量PCR技术检测非小细胞肺癌组织中survivin和SIRT1的mRNA表达情况，研究两者之间的相关性，并在细胞水平上应用吉非替尼处理非小细胞肺癌细胞系HCC827来观察survivin和SIRT1这两种基因表达的变化。

1 资料与方法

1.1 细胞和标本来源

非小细胞肺癌细胞株HCC827购自中国科学院上海细胞生物学研究所；42例临床病理资料完整的非小细胞肺癌标本来自江苏省肿瘤医院，于2011年1月10日至2011年12月15日期间在手术时采集。收取的标本迅速置液氮罐内保存，然后转至-80 ℃超低温冰箱冻存备用。标本均有对应的癌旁组织(距肺癌组织5 cm以外的肺组织)，且经病理学确诊。患者年龄在43～79岁之间，中位年龄60岁。男性23例，女性19例。根据1997年国际抗癌联盟(UICC)分期标准进行TNM分期，其中Ⅰ～Ⅱ期14例，Ⅲ～Ⅳ期28例。中、高分化者19例，低分化者23例。

1.2 试剂及引物

主要试剂来源：RPMI 1640培养基、胎牛血清(Gibco公司)，Trizol(Invitrogen公司)，反转录试剂盒、Taq酶、2×SYBR Green PCR Master Mix(TaKaRa公司)，兔抗人EGFR多克隆抗体(Abcam公司)，survivin和SIRT1多克隆抗体来自Cell Signaling Technology，吉非替尼片(Astra Zeneca公司)。

实时定量引物均由TaKaRa公司合成，survivin基因：上游引物 AGGACCACCGCATCTCTACAT；……